国家自然科学基金(31170612)
- 作品数：12 被引量：37H指数：4
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- 11种杀虫剂对松墨天牛延伸因子2(EF-2)基因表达的影响被引量：1
- 2014年
- [目的]研究杀虫剂对松墨天牛延伸因子2（MaEF-2）的影响,为深入研究MaEF-2的功能、利用延伸因子基因靶标有效防治松墨天牛提供参考.[方法]从松墨天牛文库中分离得到EF-2cDNA序列,利用RT-qPCR技术测定了11种杀虫剂胁迫后MaEF-2的相对表达量.[结果]得到的MaEF-2基因的部分序列,长度为1 184bp,编码287个氨基酸;与黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）和家蚕（Bombyx mori氨基酸相似性分别为92％和93％.RT-qPCR测定结果表明,杀虫剂作用下MaEF-2均上调表达,表达量为对照的1.28 ～11.59倍.[结论]啶虫脒的相对表达量最高,毒死蜱和噻虫啉的表达量最低,这可能表明松墨天牛产生了自我保护反应.
- 罗淋淋林同
- 关键词：松墨天牛杀虫剂RT-QPCR
- 松墨天牛分子生物学研究进展被引量：5
- 2014年
- 松墨天牛Monochamus alternatus Hope是危害马尾松Pinus massoniana等林木的重大森林害虫,成虫又是松材线虫Bursaphelenchus xylophilus(Steiner et Buhrer)Nicle的主要传播媒介,因其危害严重且防治困难已被世界上许多国家列入检疫对象。建立安全有效的松墨天牛防治方法有赖于多学科的参与,其中分子生物学将成为松墨天牛研究的重要工具。从松墨天牛的分子生态学、线粒体组、基因克隆、RNA干扰等几个方面综述了其在分子生物学领域的研究进展,拟为用新的方法和思路进行松墨天牛的基础理论研究和防治提供参考依据。
- 罗淋淋韦春梅林同
- 关键词：松墨天牛分子生物学分子生态学基因克隆RNA干扰
- 基因芯片技术在昆虫抗药性研究中的应用
- 2015年
- 化学杀虫剂滥用导致昆虫抗药性问题日渐突出,研究昆虫抗药性是为了更有效地防治害虫。基因芯片为害虫抗药性研究提供了理想的平台。综述了基因芯片技术在昆虫抗药性研究中的应用进展,重点总结了细胞色素P450氧化酶、酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶等解毒酶基因和乙酰胆碱酯酶等靶标酶基因的表达情况,为在分子水平上研究昆虫抗药性提供了依据,为从基因组学水平深入、全面开展昆虫与农药的互作研究奠定了基础。
- 吴华俊罗淋淋林同
- 关键词：基因芯片昆虫抗药性
- 松墨天牛表皮蛋白基因的克隆及表达分析被引量：9
- 2014年
- 【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus ahernatus Hope中昆虫表皮蛋白（ICP）基因在幼虫各组织中和不同发育阶段的时空表达模式。【方法】用cDNA末端快速扩增方法（rapid amplification of cDNAends，RACE）克隆了松墨天牛表皮蛋白基因，用实时荧光定量PCR分析了该基因在幼虫体内和不同虫态中的表达。【结果】克隆获得的松墨天牛幼虫表皮蛋白基命名为MoallCP（GenBank登录号：AGX00998．1），开放阅读框长408bp，编码135个氨基酸，推测得到的蛋白的分子量为14．51kDa。由MoallCP推导的蛋白与桑天牛Apriona germariICP（AAM66718．1）氨基酸序列一致性为79％；与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennisICP（NP-001161297．1）、果蝇Drosophila mojavensisICP（XP_002005461．1）、玉带凤蝶Papilio polytesICP（BAMl8876．1）等19种昆虫表皮蛋白的氨基酸序列一致性在35％～45％之间；在第10—26位氨基酸位处含有一个跨膜片段。MoallCP在幼虫头、体壁、脂肪体、血细胞、中肠和马氏管均有表达；在蛹和成虫中的表达量分别是在幼虫中的44％和161％。【结论】MoallCP与其他昆虫有较高的氨基酸序列一致性。MoallCP在松墨天牛幼虫内广泛表达；在各个发育阶段中，以成虫中的表达量最高。本文为进一步研究松墨天牛表皮蛋白基因的生理功能和松墨天牛的表皮化学奠定基础。
- 许雯罗淋淋吴华俊韦春梅林同
- 关键词：松墨天牛表皮蛋白基因克隆荧光定量PCRRACE
- 松墨天牛核糖体蛋白(RPS15A)cDNA的克隆及农药胁迫对其表达的影响被引量：3
- 2016年
- 【目的】研究不同类型农药胁迫下松墨天牛核糖体蛋白基因表达的变化,为靶标防治松树重要害虫松墨天牛提供理论依据和参考。【方法】从构建的松墨天牛cDNA文库中获得表达序列标签(EST),用Blast程序从GenBank数据库中查找同源序列,克隆得到松墨天牛的一个核糖体蛋白基因;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测11种农药胁迫下该基因的表达。【结果】从松墨天牛cDNA文库中获得1条EST序列与昆虫核糖体蛋白S15A(RPS15A)同源的基因,命名为MaRPS15A。MaRPS15AcDNA长504bp,含有5′、3′非编码区和长393bp的开放阅读框,编码130个氨基酸,预测的蛋白质分子质量为14.75ku,理论等电点为9.95。MaRPS15A与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)核糖体蛋白RPS15A的相似性为98%,与其他昆虫核糖体蛋白RPS15A的相似性大于88%。除溴氰菊酯外,其他农药胁迫导致MaRPS15A相对表达量下降。【结论】成功克隆了松墨天牛核糖体蛋白基因MaRPS15A(GenBank登录号:KJ930032)。大多数农药抑制了MaRPS15A的表达,表明松墨天牛受到了不利影响。
- 罗淋淋蔡紫玲林同
- 关键词：松墨天牛核糖体蛋白农药胁迫
- 松墨天牛肌钙蛋白T基因全长cDNA克隆及分析被引量：2
- 2015年
- 采用c DNA末端快速扩增(RACE)方法获得了松墨天牛(Monochamus alternatus)肌钙蛋白T基因c DNA,全长1531bp,命名为Ma Tn T(Gen Bank:KJ756400).该基因开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,等电点为9.26,推测的编码蛋白质分子质量为37.29 ku.同源比对结果表明:Ma Tn T与褐飞虱(Nilaparvata lugens)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)等12种昆虫肌钙蛋白氨基酸同源性为87%-88%;构建的系统发育树显示Ma Tn T处于独立分支;Ma Tn T没有信号肽和跨膜螺旋,属于亲水性氨基酸,二级结构包含了螺旋和不规则卷曲两种形式,含有丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位点数分别为8、9、3个.RT-q PCR检测表明,Ma Tn T基因在幼虫、蛹和成虫中均有表达;在成虫触角和足中表达量最高.
- 吴华俊许雯林同
- 关键词：松墨天牛肌钙蛋白基因克隆PCR
- 松墨天牛ATP合成酶D亚基基因的鉴定与表达被引量：4
- 2015年
- 【目的】研究松墨天牛ATP合成酶D亚基基因的鉴定及其表达特性,为开展昆虫ATP合成酶基因研究提供分子信息和参考,为深入研究ATP合成酶基因在松墨天牛中的生理、毒理作用奠定基础。【方法】对从松墨天牛c DNA文库中克隆的一条表达序列标签(EST)进行3'c DNA末端快速扩增,将获得的扩增序列与c DNA文库中的序列进行拼接,经开放阅读框(ORF)检索和Blast同源比对鉴定基因;用Prot Param tool软件分析基因编码的蛋白质性质,用DNAMAN软件构建系统发育树,用实时荧光定量PCR分析基因在不同虫态、成虫各部位和幼虫组织中的表达特性。【结果】获得了1条长度为1 133 bp的c DNA,其5'端非编码区长89 bp,3'端非编码区长294 bp,ORF长750 bp,编码ATP合成酶D亚基,命名为MaATPSE(Gen Bank登录号:KM101044)。MaATPSE编码249个氨基酸残基,预测分子质量为28.21 k Da,等电点为9.40,稳定系数为31.13。MaATPSE含有3个丝氨酸磷酸化位点、4个苏氨酸磷酸化位点、2个酪氨酸磷酸化位点和1个糖基化位点。松墨天牛与黑腹果蝇和家蚕的MaATPSE相似性均为83%;松墨天牛与赤拟谷盗在系统发育树上聚成一支,相似性为87%,与其他非鞘翅目昆虫的遗传距离较远。MaATPSE在蛹和幼虫的相对表达量分别是成虫的3.70和2.65倍,各虫态之间表达有显著差异(P<0.05);MaATPSE在幼虫各组织中均有表达,在脂肪体中的表达量最高,为对照的5.94倍,其次是体壁和血淋巴,分别为对照的3.93和2.88倍;中肠和马氏管的表达量较低,分别为对照的0.24和0.28倍;除马氏管和中肠的相对表达量无显著差异外,各组织均有显著差异(P<0.05)。MaATPSE在成虫头、腹、触角、足和翅的相对表达量分别为对照的2.24,3.09,3.52,3.39和4.45倍,胸部的表达量较低,为对照的0.68倍;成虫各部位之间相对表达量有显著差异(P<0.05)。【结论】克隆到松墨天牛ATP合成酶D亚基基因MaATPSE,包括5'和3'非编�
- 罗淋淋吴华俊林同
- 关键词：松墨天牛ATP合成酶基因表达RT-QPCRRACE
- 松墨天牛铁蛋白重链相似物的cDNA克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2014年
- 昆虫铁蛋白(ferritin)由两个亚基组成,类似于脊椎动物铁蛋白的重链和轻链。从松墨天牛(Monochamus alternatus)cDNA文库中筛选出ferritin基因的重链同源物(HCH)cDNA序列,其开放阅读框(ORF)长669 bp,编码222个氨基酸,命名为Mafer,GenBank登录号为KJ872588,该序列推测的蛋白分子质量为25.8 ku,等电点为5.72。预测的松墨天牛ferritin信号肽长度为18个氨基酸残基,在5′非编码区没发现铁反应元件(IRE),N末端有保守的半胱氨酸,符合脊椎动物重链特点。相似性比对显示,松墨天牛ferritin与光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)和桑天牛(Apriona germari)ferritin的相似性分别为93%和69%;系统进化树分析显示,松墨天牛与光肩星天在同一分支下,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)亲缘关系较远。
- 罗淋淋吴华俊林同
- 关键词：松墨天牛铁蛋白
- 松墨天牛包囊蛋白基因的克隆及表达特性分析被引量：4
- 2016年
- 松墨天牛Monochamus alternatus是危害马尾松树重大蛀干害虫,也是松材线虫的主要传播媒介昆虫,对我国松林资源构成严重威胁。用c DNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了松墨天牛ERP基因(Mal ERP),Gen Bank登录号为KF357881.1。该基因含有一个长为864 bp的开放阅读框,编码287个氨基。同源性分析表明,Mal ERP与光肩星天牛Anoplophora glabripennis ERP的同源性最高,达到79%;与赤拟谷盗Tribolium castaneum的同源性为45%。实时荧光定量PCR分析显示,Ma ERP在松墨天牛3龄幼虫的脂肪体、马氏管、中肠、体壁、血淋巴和头部中均有表达,在脂肪体中的表达量最高;Ma ERP经溴氰菊酯、磷化铝、B t、印楝素、绿僵菌胁迫后,上调表达;但经阿维菌素胁迫后,下调表达。本研究为进一步研究Mal ERP基因在松墨天牛防御过程中的作用奠定基础,为探索松墨天牛免疫系统与分子毒理互作关系提供参考。
- 毛珊珊吴华俊林同
- 关键词：松墨天牛基因表达农药胁迫
- 同安钮夜蛾核型多角体病毒Opdi108基因的分子克隆和细胞定位(英文)被引量：1
- 2012年
- 【目的】同安钮夜蛾Ophiusa disjungens(鳞翅目,夜蛾科)是危害桉树的主要害虫之一。同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)是从O.disjungens中分离到的新病毒。本研究主要目的是从分子水平上了解该病毒。【方法】对一条PstⅠ的酶切片段进行了克隆、测序和分析。【结果】在基因数据库中通过对碱基序列的比对,发现了一个Ac108的同源基因,命名为Opdi108(GenBank登录号为EU732666)。该基因的开放阅读框含有225对碱基,其编码蛋白与其他已知杆状病毒同源物有16%～37%的氨基酸序列一致性。在起始密码子ATG上游有一个晚期启动子TAAG。C末端含有His-tag的Opdi108基因在大肠杆菌中Escherichiacoli进行了表达,融合蛋白的分子量为28.7kDa。以荧光蛋白EGFP为标记物,构建了Opdi108与EGFP的重组体,利用Bac-to-Bac表达系统实现了与AcMNPV的重组,用该重组病毒vEGFP-Opdi108感染斜纹夜蛾Trichoplusiani细胞。感染24和72h后分别用共聚荧光显微镜观察,发现Opdi108定位在细胞质内。【结论】本研究从分子生物学角度研究OpdiNPV,为进一步利用该病毒防治包括同安钮夜蛾在内的害虫,以及构建重组杀虫剂等奠定基础。
- 常润磊刘莉韦春梅郎国俊许雯毛珊珊林同
- 关键词：核型多角体病毒细胞定位
