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巴西橡胶树胶乳酵母双杂交cDNA表达文库的构建及分析被引量：2: 2013年; 提取巴西橡胶树胶乳总RNA,并纯化mRNA.采用特异引物（oligo-dT）反转出第一链DNA,经LDPCR合成第二链DNA.将ds cDNA和经Sma Ⅰ线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母菌,构建酵母双杂交cDNA表达文库.结果表明,转化单菌落个数为2.8 ×107;文库滴度为4.92×107·mL-1;插入片段大小主要分布于500 ～2 000 bp间;重组率为96％.实验数据表明该文库能满足后续的杂交筛选.; 杨子平李辉亮郭冬彭世清; 关键词：橡胶树酵母双杂交 CDNA文库

巴西橡胶树HbCZF1的原核表达分析: 2014年; 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase,HMGR)是天然橡胶生物合成途径中的关键酶之一,在先前的研究中本课题组已克隆了与Hmgr1启动子互作的转录因子基因HbCZF1。本研究在此基础上,构建了HbCZF1的原核表达载体PET-28a(+)-HbCZF1,将其转化E.coli Rosetta(DE3)菌株。经优化条件后,在20℃,0.1 mmol/L IPTG诱导4 h的条件下,获得了分子量约47 ku的HbCZF1融合蛋白。; 易红艳郭冬李辉亮彭世清; 关键词：巴西橡胶树原核表达蛋白纯化

巴西橡胶树HbDRM的克隆与表达分析被引量：1: 2014年; 运用PCR和RACE技术从巴西橡胶树中克隆出了一个域重排甲基转移酶(Domains rearranged methyltransferase,DRM)基因(HbDRM)。HbDRM全长为2 245 bp,含有1 917 bp的阅读框,145 bp的5′-UTR和176 bp 3′-UTR,编码638个氨基酸,分子量为71.39 ku,等电点为4.90。HbDRM的氨基酸序列与可可、葡萄、黄瓜、鹰嘴豆、番茄、拟南芥DRM家族成员的同源性分别为77%、74%、72%、67%、64%和52%。定量RT-PCR分析表明HbDRM在巴西橡胶树的根、树皮、叶、花、胶乳、胚和愈伤组织中均有表达,其中在花和愈伤组织中表达量较高,在胶乳中表达量最低,此外HbDRM在橡胶树自根幼态无性系的胶乳中表达比其供体胶乳中的表达低。HbDRM的克隆和表达分析为下一步研究HbDRM在巴西橡胶树自根幼态无性系高产中的作用打下基础。; 汪晗李辉亮杨子平郭冬彭世清; 关键词：巴西橡胶树 DNA甲基化

巴西橡胶树HbMET的克隆与表达分析: 2015年; 通过同源克隆和RACE方法获得了巴西橡胶树DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferase,MET)基因(Hb MET)。Hb MET长4 896 bp,含有4 635 bp的阅读框架,编码1 545个氨基酸。蛋白分子量174.36 ku,等电点为6.36。氨基酸序列与可可、毛果杨、黄瓜、拟南芥、碧桃、葡萄和烟草等物种的MET家族成员的同源性分别为73%、77%、74%、56%、72%和68%。进化树分析表明,Hb MET氨基酸序列与毛果杨的MET亲缘关系最近。Hb MET在巴西橡胶树的根、树皮、叶、胶乳中均有表达,其中在胶乳中表达量最低;Hb MET在橡胶树自根幼态无性系的胶乳中表达比老态无性系胶乳中的表达低。; 李辉亮郭冬汪晗杨子平彭世清; 关键词：巴西橡胶树 DNA甲基转移酶 DNA甲基化

巴西橡胶树HbMADS4的克隆及原核表达分析被引量：4: 2015年; 为了探讨巴西橡胶树自根幼态无性系高产的分子机制,通过抑制缩减杂交获得了在巴西橡胶树自根幼态无性系和老态无性系胶乳中差异表达的基因片段。为进一步鉴定差异表达基因的功能,对相关基因进行克隆。通过RACE方法克隆一个新的橡胶树MADS-box转录因子基因(命名为Hb MADS4),Hb MADS4全长984 bp,含有633 bp的阅读框,编码230个氨基酸。推测Hb MADS4蛋白分子量为23.71 ku,等电点为7.61,在N端含有典型的MADS-box结构域。构建Hb MADS4原核表达载体p Hb MADS4,将其转化E.coli,经优化条件后,在20℃,0.1 mmol/L IPTG诱导4 h的条件下,获得Hb MADS4融合蛋白。Hb MADS4的克隆和Hb MADS4融合蛋白的获得为深入研究Hb MADS4的功能奠定基础。; 魏利然李辉亮郭冬杨子平彭世清; 关键词：巴西橡胶树原核表达蛋白纯化

巴西橡胶树HbCMT1的克隆与表达分析: 2015年; 通过PCR和RACE技术克隆获得了巴西橡胶树染色质甲基化酶(CMT,chromomethylase)基因(Hb CMT1)。Hb CMT1全长2697 bp,含有2556 bp的阅读框,编码851个氨基酸。推测Hb CMT1分子量为95.67 k D,等电点为5.38,氨基酸序列与可可、烟草、葡萄、黄瓜、鹰嘴豆和拟南芥等CMT家族成员的同源性分别为66%、51%、50%、56%、53%和50%。定量PCR分析表明Hb CMT1在巴西橡胶树的根、树皮、叶、胶乳中均有表达,其中在叶中表达量最高,在胶乳中表达量最低。此外Hb CMT1在橡胶树自根幼态无性系胶乳中的表达量比老态无性系胶乳中的低。; 李辉亮汪晗杨子平郭冬彭世清; 关键词：巴西橡胶树 DNA甲基化

巴西橡胶树HbR3HP1的克隆及表达分析: 2013年; 根据已获得的1个在巴西橡胶树自根幼态无性系与老态无性系之间差异表达的SSH片段的序列信息设计引物,通过RACE方法获得了1个橡胶树编码含有R3H结构域蛋白的cDNA(命名为HbR3HP1)。序列分析结果表明:HbR3HP1长为1 286 bp,含有1 056 bp的阅读框、30 bp的5′-UTR和160 bp的3′-UTR,HbR3HP1编码的蛋白质由351个氨基酸组成,分子量为40.23 ku,等电点为8.29。HbR3HP1含有保守的R3H结构域,与1个蓖麻、1个蒺藜苜蓿和3个拟南芥的含有R3H结构域蛋白的同源性分别为82%、64%、65%、56%和54%。定量PCR分析结果表明,HbR3HP1在橡胶树的根、花、叶、树皮、胶乳中均有表达,在树皮和胶乳中表达量相对较高;茉莉酸可以诱导HbR3HP1的表达,乙烯对HbR3HP1的表达基本无影响。; 李辉亮郭冬彭世清; 关键词：巴西橡胶树特异表达茉莉酸乙烯

巴西橡胶树体细胞胚发生过程中DNA甲基化分析被引量：6: 2015年; 为探讨巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)自根幼态无性系与供体间差异产生的原因,应用甲基化敏感扩增多态性扩增技术,对巴西橡胶树体细胞胚发生过程中基因组DNA胞嘧啶甲基化程度和模式进行了分析。结果表明,在巴西橡胶树体细胞胚发生过程中不同阶段的DNA甲基化程度不同,以花药的DNA甲基化程度最高,体细胞胚的DNA甲基化水平最低。在体细胞胚发生过程中出现了I、Ⅱ和Ⅲ3种类型的甲基化多态性带型的改变,包括他们的出现与消失。因此,橡胶树体细胞胚发生过程中可能通过DNA甲基化甲基化和去甲基化来调控基因的表达。; 李辉亮郭冬彭世清; 关键词：橡胶树体细胞胚 DNA甲基化甲基化敏感扩增多态性

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国家自然科学基金(31170634)