国家自然科学基金(31170652)
- 作品数：9 被引量：52H指数：5
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- 葡萄风信子谷胱甘肽S转移酶基因克隆与表达分析被引量：3
- 2016年
- 以亚美尼亚葡萄风信子为材料,利用本课题组前期获得的葡萄风信子转录组数据库,根据已经获得的葡萄风信子GST基因片段,通过PCR技术克隆得到葡萄风信子GST基因的c DNA序列,命名为Ma GST。Ma GST的c DNA全长为711 bp,开放阅读框为666 bp,编码221个氨基酸,推测蛋白质分子量为54.1 k D,理论等电点p I为5.13。利用生物信息分析软件对Ma GST基因进行同源性比对和系统进化分析表明,结果显示该基因编码的氨基酸具有谷胱甘肽S转移酶典型的C端与N端双结构域,属于GST Tau家族蛋白;与洋葱和小麦GST基因的一致性分别为76.72%和62.50%。实时定量PCR结果显示Ma GST在葡萄风信子各组织器官表达强度相似,属于组成型表达;水杨酸(SA)可以明显诱导Ma GST表达,Ma GST对氯化钠(Na Cl)应答不是很明显,甚至表达量有稍微的下调。
- 杨慧萍刘雅莉娄倩刘妮妮
- 关键词：谷胱甘肽S转移酶克隆荧光实时定量PCR胁迫
- 葡萄风信子MaFLS基因克隆与表达分析被引量：5
- 2014年
- 该研究利用PCR技术从葡萄风信子‘亚美尼亚’中克隆了1个黄酮醇合成酶(FLS)基因,命名为MaFLS。MaFLS的cDNA全长为1 076bp,开放阅读框为999bp,编码332个氨基酸,推测的蛋白质分子量38.51kD,理论等电点为5.09。同源比对和系统进化分析表明,MaFLS基因编码的氨基酸具有黄酮醇合成酶典型的2-ODD超家族保守结构域,与拟南芥和高粱FLS一致性分别为60%和83%。半定量PCR和荧光实时定量PCR表达分析表明,MaFLS在花器官中高表达,在根、茎、叶中微量表达,在完全未着色的花蕾期开始表达并于花完全开放未着色时期到达峰值,之后随花发育表达量逐渐降低。原核表达检测到1条大约38kD的外源蛋白,与预测的蛋白分子量相符。该研究结果为进一步探讨葡萄风信子MaFLS基因对黄酮类物质合成的调控作用奠定了基础。
- 杨慧萍刘雅莉娄倩李志根
- 关键词：葡萄风信子克隆荧光实时定量原核表达
- 百合愈伤组织的诱导及瞬时表达的研究被引量：4
- 2013年
- 以百合品种‘罗宾娜’(Robina)鳞片、花丝和花梗分化的不定芽为试材,诱导愈伤组织,并通过固体、液体和经过液体预培养后在固体上培养的方式继代增殖。结果表明:分化的不定芽在萘乙酸(NAA)0.5mg/L的培养基上愈伤组织的诱导率最高;从芽基部形成的愈伤组织以经过液体预培养后在固体上培养的方式继代,繁殖速率最大,再生率为100%。使用农杆菌介导转化pCAMBIAl301质粒后,3种不同方式培养的愈伤组织的GUS瞬时表达效率差异并不显著。
- 权永辉刘雅莉祁银燕姜玲田菲菲杜灵娟
- 关键词：百合愈伤组织植株再生
- 葡萄风信子MaANS基因及启动子的克隆与分析被引量：5
- 2015年
- 该研究根据转录组测序结果,在葡萄风信子（Muscari armeniacum）‘亚美尼亚’中克隆到花青素合酶（ANS）基因的cDNA与DNA序列,该基因命名为MaANS。采用荧光实时定量分析MaANS时空表达模型,同时利用染色体步移法克隆到MaANS上游1 044bp的一段序列。信息学分析表明：MaANS开放阅读框为1 065bp,编码355个氨基酸;DNA与cDNA的一致性为89.62%,DNA序列在ATG下游515~594bp之间插入1个79bp内含子;启动子序列在-70bp位置有1个TATA-box,有多个光响应元件及MYB结合位点等。荧光实时定量分析表明,MaANS基因在花中优势表达,并且在完全着色期表达量最高。该研究结果为深入研究MaANS基因功能、分析葡萄风信子着色机理奠定了基础。
- 安维忠刘雅莉刘红利陈凯利
- 关键词：葡萄风信子启动子荧光实时定量
- 农杆菌介导的ACO-RNAi载体对百合胚性愈伤的转化被引量：9
- 2015年
- 【目的】建立高效稳定的百合遗传转化体系,以得到甁插寿命长、开花早的百合转基因品种。【方法】以OT百合"罗宾那"的胚性愈伤组织为供试材料,从共培养方式(固体或液体共培养)、农杆菌菌液浓度(OD600=0.4,0.6,0.8,1.0,1.2)、亚精胺浓度(0.5,1.0,1.5,2.0μmol/L)以及超声波处理(功率60 W,处理时间分别为0,1,2,3,4min)等方面对百合遗传转化体系进行优化。【结果】液体共培养能提高稳定表达率并减少褐化率,稳定表达率为13.00%,褐化率为55.00%;农杆菌菌液浓度(OD600)在0.8时为最适侵染浓度,此时稳定表达率为12.77%,褐化率为55.00%;侵染前向菌液中加入2.0μmol/L亚精胺能提高转化效率,稳定表达率为88.30%;当超声波功率为60W、处理时间为3min时,百合胚性愈伤的瞬时表达率和稳定表达率均最高,分别为88.90%和27.33%;潮霉素抗性植株经GUS组织化学染色、目标基因PCR检测及Southern blot分析,证明目的基因已整合到百合基因组中。【结论】转化条件的优化能够有效提高农杆菌介导的百合胚性愈伤组织的遗传转化率。
- 田菲菲刘雅莉杜灵娟权永辉
- 关键词：百合农杆菌亚精胺
- 葡萄风信子MaMYB1基因的克隆及表达分析被引量：1
- 2014年
- 【目的】克隆葡萄风信子MYB转录因子基因(MaMYB1),并对其进行生物信息学和表达模式的分析。【方法】以开蓝色花的葡萄风信子品种"亚美尼亚"为材料,利用RACE技术得到其MaMYB1基因cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用酵母单杂交方法检测其转录激活活性,并用实时定量PCR方法分析该基因在根、茎、叶及不同发育时期花中的表达特性。【结果】通过RACE-PCR,克隆得到953bp的MaMYB1基因,其开放阅读框长750bp,编码249个氨基酸,推测的蛋白分子质量约为27.7ku,理论等电点为9.3。MaMYB1基因编码的蛋白序列中具有2个典型的MYB结构域R2和R3,且在R3结构域下游含有与BHLH蛋白结合的[D/E]Lx2[R/K]x3Lx6Lx3R结构域。MaMYB1与玉米ZmP1及拟南芥MYB12的关系较近。酵母单杂交检测表明:MaMYB1具有转录激活活性。实时定量PCR分析结果表明:MaMYB1在不同组织中均有表达,以在花中表达量较高,且在花不同发育时期表达量差异显著。【结论】从葡萄风信子中克隆到1个新的MYB基因MaMYB1;推测该基因可能参与了葡萄风信子花发育过程的调控。
- 姜玲刘雅莉娄倩焦淑珍权永辉
- 关键词：葡萄风信子MYB转录因子基因克隆
- 蓝色花葡萄风信子关键基因DFR和FLS调控花青苷积累的功能研究
- 葡萄风信子(Muscari spp.)是一种重要的观赏球根花卉。因其独特的蓝色色调和花型,被用于花园地被和家庭盆栽种植,也为研究蓝色花呈色机理提供了理想材料。葡萄风信子的花色形成主要依赖于类黄酮物质,特别是蓝色花青素衍生...
- 刘红利
- 关键词：葡萄风信子花青苷
- 文献传递
- 葡萄风信子转录因子MaMYB2的克隆及表达模式分析被引量：5
- 2015年
- 试验从葡萄风信子"亚美尼亚"中利用RACE技术克隆了一个MYB类转录因子,命名为MaMYB2,Genebank登陆号为KJ744038。克隆到的MaMYB2全长711bp,开放阅读框为600bp,编码199个氨基酸,推测的蛋白分子量约为22.34ku,理论等电点为5.46,保守域具有DNA结合位点;与矮牵牛(AAF66730.1)关系最近;核定位试验表明MaMYB2蛋白定位在细胞核中;实时定量PCR分析了MaMYB2在葡萄风信子"亚美尼亚"不同组织部位中的表达模式,结果不同组织中均有表达,在花中表达量最高,且随着花色变深表达量逐渐升高。结果表明,MaMYB2有可能参与了葡萄风信子中花青素积累的转录调控。
- 李志根刘雅莉杨慧萍刘妮妮
- 关键词：葡萄风信子MYB转录因子基因克隆
- 葡萄风信子外植体直接再分化花芽和营养芽的研究
- 2015年
- 【目的】探索葡萄风信子直接再生花芽体系的建立,为葡萄风信子外植体直接再分化花芽研究提供参考。【方法】以葡萄风信子‘亚美尼亚’花蕾外植体为材料,MS为基础培养基,在均添加0.1mg/L 2,4-D的条件下,分别用不同质量浓度的6-BA(0,0.5,1,2,3,4mg/L)、GA3(0,0.5,1,2,3,4mg/L)和玉米素(0,0.05,0.1,0.5,1,2mg/L)处理,筛选出诱导花芽的最佳激素及最适质量浓度;以MS+6-BA(或玉米素)2mg/L+2,4-D 0.1mg/L研究开花时花瓣切片、花葶、叶片以及叶片诱导的愈伤组织诱导直接再分化花芽的情况。【结果】用MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D处理葡萄风信子花蕾时,可在花蕾基部直接再分化出具有蓝色的花芽,且花芽分化率最高,达60.2%。花葶、花瓣切片、叶片和愈伤组织在同样条件下只能诱导产生愈伤组织、营养芽。说明花蕾是诱导花芽分化的最佳外植体,且最适培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D。【结论】建立了葡萄风信子外植体直接再分化花芽体系。
- 刘妮妮刘妮妮娄倩刘雅莉
- 关键词：营养芽
