哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目(2008RFLXS016)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- MMP-9基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的构建小鼠基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体。方法针对小鼠MMP-9基因序列,利用公用网站按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列,并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,用插入鉴定引物进行PCR鉴定阳性克隆并测序,应用Western blot在293T细胞中鉴定MMP-9表达的下调作用。结果PCR鉴定和DNA测序结果显示合成的含MMP-9 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确;构建的MMP-9RNAi慢病毒载体能够抑制MMP-9的表达。结论应用基因工程技术,成功构建了小鼠MMP-9基因RNAi慢病毒载体,为应用于在体基因治疗创造了条件。
- 金哲秀王育珊李南
- 关键词：基质金属蛋白酶-9RNA干扰慢病毒载体
- 小鼠基质金属蛋白酶-9 RNA干扰慢病毒载体在体外的沉默效应
- 2010年
- 目的探讨构建的小鼠基质金属蛋白酶(MMP)-9 RNA干扰(RNAi)慢病毒载体在体外工具细胞中的沉默效应。方法针对小鼠MMP-9基因序列构建的MMP-9过表达克隆质粒和RNAi慢病毒载体共转染培养良好的工具细胞(293T和NIH3T3细胞),采用实时荧光定量PCR和Western印迹观察RNAi对工具细胞中MMP-9 mRNA和蛋白表达的下调作用。结果构建的MMP-9 RNAi慢病毒载体能显著降低工具细胞中MMP-9表达量。结论成功构建了能够抑制小鼠MMP-9表达的RNAi慢病毒载体,为在体研究奠定了基础。
- 金哲秀王育珊李南
- 关键词：基质金属蛋白酶-9RNA干扰慢病毒载体
