湖南省科技计划项目(2007JT3022)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：张彬宋娟蒋碧梅张任飞邓红兵更多>>
- 相关机构：长治医学院附属和平医院长治医学院中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向核仁素RNA干扰载体的构建与筛选
- 2009年
- 目的:设计靶向大鼠核仁素的RNAi序列,构建6个RNAi真核表达载体,采用转染工具细胞筛选有效靶点。方法:根据GenBank中的核仁素序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至pGCsi-lencerTMU6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,将重组质粒用脂质体转染技术导入H9C2细胞,荧光显微镜检测GFP表达以判断转染效率,Western-blot检测靶细胞中核仁素蛋白水平的表达,筛选有效干扰序列。结果:经测序鉴定,克隆的RNAi打靶序列完全正确,无碱基突变。转染H9C2细胞36 h后,荧光显微镜下可检测到GFP标记的核仁素蛋白的表达,转染效率达75%以上。Western-blot结果显示3号核仁素干扰质粒(Ncl-3)能明显下调H9C2细胞的核仁素表达。结论:成功构建靶向核仁素RNA干扰载体,并筛选出效能最优序列,为进一步相关研究奠定基础。
- 宋娟张任飞张彬邓红兵蒋碧梅
- 关键词：RNA干扰核仁素质粒构建基因转染
- 稳定表达核仁素的H9C2细胞株的建立和鉴定
- 2009年
- 目的:建立稳定表达核仁素的H9C2大鼠心肌细胞株,为进一步研究核仁素在心肌细胞凋亡中的作用提供细胞模型。方法:将含有核仁素全长的质粒pCMV-Tag2B-Nuc用脂质体转染技术导入H9C2细胞,使核仁素在细胞内表达,用G418筛选出稳定表达核仁素的细胞株;用双酶切、DNA测序鉴定质粒,用RT-PCR及Western blot检测核仁素基因在靶细胞中的整合与表达。结果:经G418反复筛选的H9C2细胞株中,核仁素基因在mRNA及蛋白质水平表达均较野生型细胞及转空载体细胞升高。结论:用含核仁素全长的质粒转染H9C2大鼠心肌细胞,经筛选后可稳定表达核仁素。
- 宋娟张任飞张彬蒋碧梅
- 关键词：核仁素H9C2细胞基因转染
