国家教育部博士点基金(20020422042)
- 作品数：15 被引量：48H指数：4
- 相关作者：周庚寅高鹏孙妍琳宋现让李文通更多>>
- 相关机构：山东大学山东省肿瘤医院第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌中细胞周期素D1基因改变和转录异常对其蛋白表达的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 :研究乳腺癌中细胞周期素D1(cyclinD1)在DNA、mRNA和蛋白水平的改变 ,探讨cyclinD1基因改变和转录异常对其蛋白表达的影响。方法 :免疫组织化学检测cyclinD1蛋白表达 ,RT PCR检测cyclinD1mRNA的转录异常 ,southern杂交检测cyclinD1的基因改变。 结果 :(1)cyclinD1蛋白在乳腺癌中表达阳性率为 5 4 %。 (2 )cyclinD1在早期乳腺癌、浸润性导管癌原发灶、腋窝淋巴结转移灶中表达阳性率的差异无统计学意义。 (3)浸润性导管癌中 15 %出现cyclinD1基因扩增 ,35 %出现cyclinD1mRNA表达升高。结论 :(1)cyclinD1蛋白表达是乳腺癌发生中的早期事件 ,且在乳腺癌进程中有稳定保持的趋势。 (2 )cyclinD1的蛋白表达除受基因扩增和mRNA表达升高的影响外 ,还受到其他因素的影响。
- 高鹏周庚寅刘文君刘志艳孙妍琳周成军
- 关键词：细胞周期素转录乳腺肿瘤
- 转染抗mdr-1核酶基因逆转肿瘤细胞耐药性的研究被引量：9
- 2004年
- 目的 研究转染抗mdr 1核酶基因能否实现对乳腺癌细胞多药耐药 (MDR)的持久逆转。方法 构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)为报告基因的核酶表达质粒并转染耐阿霉素的人乳腺癌细胞株MCF 7/ADR和敏感株MCF 7,激光共聚焦显微镜观察EGFP的表达 ,流式细胞术检测细胞转染率和P 糖蛋白含量 ,逆转录 (RT) 聚合酶链反应 (PCR)检测细胞的mdr1mRNA ,罗丹明 12 3(Rh12 3)外排实验检测细胞的P 糖蛋白转运功能。加入阿霉素 4 8h后 ,常规MTT法检测细胞存活率。结果 转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179后 ,两组实验细胞的mdr 1指数由 2 2 0分别降为 0 76和 1 4 0 ,P 糖蛋白表达率由 5 5 0 %降为 4 6 %和 18 2 % ,Rh12 3荧光强度由 2 2 0 %升为 4 6 2 %和 70 1% ,细胞存活率由 75 %降为 2 8%和 4 3%。并且核酶质粒可在细胞内稳定表达 ,转染RZ196、RZ179的实验细胞经G4 18筛选完成 2个月后 ,细胞质中仍可见明显的EGFP表达 ,细胞的mdr 1指数分别为 0 81、4 17,P 糖蛋白表达率分别为 5 2 %、19 5 % ,Rh12 3荧光强度分别为 5 1 4 %、71 6 % ,与刚完成筛选时的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179均可持久逆转肿瘤细胞MDR 。
- 高鹏周庚寅张庆慧周成军甄军晖孙妍琳
- 关键词：基因转染肿瘤细胞耐药性多药耐药基因1
- 原发性肝癌中HIF-1α、P-gp的表达及相关性的研究被引量：3
- 2007年
- 目的:观察HIF-1α和P-gp在原发性肝癌(HCC)中的表达,探讨两者相互作用的关系。方法:采用免疫组织化学法检测36例HCC及20例非肿瘤肝组织中P-gp和HIF-1α的表达,对两者均表达阳性的病例,进行免疫组织化学双标记染色。结果:36例HCC中HIF-1α和P-gp高表达,阳性率分别为58.33%和77.78%,明显高于非肿瘤肝组织(P<0.001)。两者表达呈正相关(r=0.388,P<0.05)。18例两者均表达阳性的病例中,免疫双标共表达率为61.1%。结论:HCC中HIF-1α和P-gp的表达密切相关,HIF-1α可通过上调P-gp的表达实现对化疗药物的耐受,HIF-1α有望成为评价及逆转肿瘤多药耐药的新指标。
- 喻芳周庚寅张翠娟高鹏马超李红
- 关键词：肝肿瘤P糖蛋白缺氧诱导因子1Α
- 肿瘤多药耐药及其基因治疗被引量：3
- 2005年
- 高鹏周庚寅
- 关键词：肿瘤多药耐药相关蛋白质类基因疗法
- 葡萄糖糖基神经酰胺合成酶特异性小干扰RNA表达载体的构建及其逆转乳腺癌细胞耐药的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 构建葡萄糖糖基神经酰胺合成酶(GCS)小干扰RNA表达载体,观察其对乳腺癌耐药细胞(MCF- 7 /ADR)GCS基因表达和耐药性的影响。方法 设计合成2对GCS基因的特异性siRNA,分别定向克隆入真核表达载体pSUPER,构建pSUPER -GCS1和pSUPER -GCS2重组质粒,脂质体LipofectAMINE2000介导转染MCF -7 /ADR细胞,空载体pSUPER转染作为对照,逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)分析GCSmRNA的表达,流式细胞仪观察GCS蛋白的表达,四氮唑盐法检测阿霉素对MCF -7 /ADR细胞的半数抑制浓度(IC50 ),流式细胞技术检测细胞凋亡率的改变。结果 酶切分析和测序证实成功构建了针对GCS的siRNA表达载体pSUPER -GCS1和pSUPER GCS2。两对重组质粒均可特异性抑制GCS基因表达,转染后48hGCSmRNA抑制率分别为89 .4%、88. 5%,GCS蛋白含量分别下降为8 .3%±1 .0%, 9. 2%±0 .8%,四氮唑盐法显示重组质粒对阿霉素耐药性相对逆转率分别为93. 7%、91. 6%,明显提高了乳腺癌细胞对于阿霉素的药物敏感性,流式细胞仪结果表明细胞凋亡率增加为15. 38±1 .16, 13. 92±1 .73,而空载体对照组无以上作用。结论 GCS特异性siRNA表达载体构建成功,且有效抑制了GCS基因表达,并通过诱导耐药细胞凋亡率增加,逆转乳腺癌细胞多药耐药。
- 孙妍琳周庚寅李锴男李文通宋现让高鹏
- 关键词：逆转特异性小干扰RNA合成酶神经酰胺
- 细胞表面糖蛋白表达异常与涎腺多形性腺瘤复发的关系被引量：2
- 2005年
- 目的研究多形上皮粘蛋白1(mucin1)和E_钙粘蛋白(E_cd)与涎腺多形性腺瘤复发的关系,探讨可预测涎腺多形性腺瘤复发的指标。方法以52例涎腺多形性腺瘤石蜡标本为研究对象,其中初发33例,复发12例,恶性7例。采用显微镜观察肿瘤周围包膜的状况,免疫组织化学检测初发、复发、恶性多形性腺瘤细胞的mucin1和E_cd蛋白表达情况。结果初发和复发多形性腺瘤的包膜状况差异无显著性(P>0.05)。初发多形性腺瘤细胞的mucin1蛋白表达阳性率(64%)与复发者(67%)的差异无显著性(P>0.05)。两者的差别表现为mucin1阳性表达部位分布不同,初发者主要为细胞顶膜染色(19/21),复发者主要为整个细胞膜染色(6/8),两者差异有显著性(P<0.05);恶性多形性腺瘤染色部位与复发者相同,且阳性表达率显著升高。3种肿瘤的E_cd表达阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论多形性腺瘤的包膜状况在预测其复发潜能上实际应用性不强,多形性腺瘤细胞E_cd的表达改变与其复发潜能无显著关系。Mucin1在多形性腺瘤细胞膜上的异常分布,使其倾向于向周围分散生长,这种异常分布可作为预测多形性腺瘤复发的指标之一。
- 高鹏周庚寅宋向荣侯建新张翠娟马超
- 关键词：多形性腺瘤E-钙粘蛋白
- 肿瘤治疗的新靶点HIF-1被引量：3
- 2004年
- 喻芳周庚寅
- 关键词：缺氧诱导因子肿瘤治疗学
- 17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制被引量：2
- 2007年
- 目的探讨17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的非典型多药耐药的机制。方法分别通过药物诱导和转基因的方法建立由BCRP和巨细胞病毒(CMV)启动子启动表达BCRP的两种耐药细胞系MCF-7/MX20和MCF-7/BCRP,将耐药细胞培养在含有17β-雌二醇的培养基中,通过细胞毒性实验,外排实验以及定量PCR观察对不同耐药细胞系的逆转作用。结果培养基中加入17β-雌二醇48h后,MCF-7/BCRP细胞中的米托蒽醌的强度明显低于MCF-7/MX20,MCF-7/BCRP细胞中BCRP mRNA的含量明显高于MCF-7/MX20。17β-雌二醇可以抑制细胞中BCRP的表达和功能,但是不能抑制MCF-7/BCRP细胞中BCRP的表达和功能。结论17β-雌二醇不是作为BCRP的底物而抑制BCRP功能的,而可能是通过调控BCRP基因的启动子发挥作用。
- 李文通周庚寅宋现让迟伟玲魏玲王兴武张晓芳
- 关键词：乳腺癌耐药蛋白耐药逆转
- 乳腺癌组织中多形上皮黏蛋白1表达与肿瘤侵袭力的研究被引量：2
- 2005年
- 目的 探讨多形上皮黏蛋白 1 (mucin1 )表达异常与乳腺癌细胞侵袭力的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测 97例乳腺肿瘤组织中mucin1的表达。乳腺癌细胞株MCF 7转染反义寡核苷酸(ASODN)后,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)检测mucin1mRNA,应用流式细胞术检测mucin1表达阳性率,细胞侵袭实验检测细胞侵袭力。结果 mucin1在癌旁正常乳腺组织和乳腺良性肿瘤组织中均为细胞顶膜阳性表达,而在早期乳腺癌 (30例 )、乳腺浸润性癌 (18例 )、乳腺癌淋巴结转移灶(17例)中为整个细胞膜阳性表达。与乳腺原位癌相比,微小浸润癌的mucin1表达强度升高(P=0. 04),而乳腺浸润性癌与乳腺癌淋巴结转移灶之间mucin1表达强度差异无统计学意义(P=0. 56)。转染ASODN的乳腺癌细胞株,其mucin1mRNA和mucin1蛋白表达率显著下降 (P<0. 05),细胞侵袭实验中,侵袭细胞数明显减少(P<0 .05),正义组实验细胞无类似改变。结论 乳腺癌细胞mucin1在细胞膜的异常分布及表达升高可促使癌细胞间相互排斥而易于向周围侵袭生长,但该异常表达可能与其淋巴道转移关系不大。针对mucin1mRNA的ASODN可抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。
- 高鹏周庚寅张庆慧相磊马超虞华鹏喻芳
- 关键词：阳性表达ASODN黏蛋白淋巴结转移灶瘤组织
- 短发夹状RNA抑制GCS基因在人乳腺癌细胞的表达及逆转其多药耐药被引量：3
- 2006年
- 目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用。方法设计2对GCS基因编码的反向重复序列,中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER。转染乳腺癌细胞,Westernblot和免疫细胞化学方法测定GCS表达。Westernblot、比色法检测细胞内caspase-3的表达,流式细胞仪分析细胞凋亡率。四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度。结果酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功。转染后GCS蛋白含量分别下降80%和82%,GCS表达阳性率降低为18·1%和16·7%。caspase-3表达和活性均显著增强,细胞凋亡率明显增加,细胞对化疗药物耐药性有明显下降。结论shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达,并可提高其对多种化疗药物的敏感性。
- 孙妍琳周庚寅孙建国林晓燕李红白艳花张翠娟
- 关键词：短发夹状RNA乳腺癌葡萄糖神经酰胺合成酶凋亡
