湖北省自然科学基金(2012FFB04904)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：武汉科技大学华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响
- 2015年
- 目的：本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法利用NCBI数据库，寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区，分析全长蛋白序列，检索出SPAG6有7个ARM区域。利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA，测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中，对阳性克隆进行酶切和测序鉴定，将构建的重组质粒转染到CHO细胞中，分别提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位。结果酶切和测序鉴定表明，全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功，转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达，但仅全长表达产物定位于微管，缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位。结论SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长。该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础。
- 汪智琼张玲石玉琴李红飞张志兵
- 关键词：不育
- 成纤维细胞生长因子21对脑缺血再灌注大鼠脑组织病理损伤和氧化应激的影响被引量：4
- 2021年
- 目的探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对脑缺血再灌注大鼠脑组织病理损伤和氧化应激的影响。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,将所有大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和FGF21低剂量组、FGF21中剂量组、FGF21高剂量组。检测各组大鼠脑含水量、神经损伤评分;TTC染色检测脑梗死面积;苏木精-伊红染色检测脑组织病理损伤程度;TUNEL染色检测神经元细胞凋亡;蛋白免疫印迹检测神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达水平;检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量。结果与模型组比较,FGF21中剂量组、FGF21高剂量组脑含水量、神经损伤评分降低(P<0.05),脑梗死面积减小(P<0.05),病理损伤程度改善,NGF、BDNF蛋白水平降低(P<0.05),神经元细胞凋亡率降低(P<0.05),Caspase-3、Caspase-8蛋白水平降低(P<0.05),SOD含量升高(P<0.05),MDA、LDH含量降低(P<0.05)。结论FGF21可改善脑缺血再灌注大鼠脑组织病理损伤,调节氧化应激,抑制神经元细胞凋亡。
- 张锋侯君付良姣袁丹崔浩
- 关键词：脑缺血再灌注成纤维细胞生长因子21病理损伤氧化应激
- BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位被引量：1
- 2013年
- 目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PCR扩增全长BC022687编码序列,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的pEGFP-C1真核表达载体中。将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,提取细胞蛋白进行Western印迹检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察BC022687/GFP融合蛋白在CHO细胞内定位。结果:翻译BC022687蛋白的cDNA序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小950 bp。Western印迹检测到相对分子质量约为64 000的融合蛋白表达。BC022687/GFP融合蛋白在细胞内定位以细胞质为主,并在中心体、纤毛形成的模板表达。结论:成功构建BC022687全长基因真核表达载体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 李红飞张玲石玉琴汪智琼江高峰宋世震付国庆张志兵
- 关键词：中心体CHO细胞
- 精子相关抗原6与肿瘤早期诊断的研究进展被引量：3
- 2014年
- 精子相关抗原6（SPAG6）为新发现的癌睾丸抗原（cancer-testis antigens, CTA）家族的一员，是一种具有巨大肿瘤早期诊断的前景蛋白。SPAG6基因是1999年Neilson等[1]在用男性不育患者的高滴度抗精子抗体血清来筛选睾丸表达基因文库时克隆出来的。目前发现SPAG6在肿瘤组织中的特异性表达，以及其能引起特异性的体液免疫应答的特点，均符合肿瘤生物标记物的筛选标准。因此该基因可能适用于肿瘤早期诊断。本文就国内研究相对较少的SPAG6的基本特征、功能以及其与肿瘤早期诊断作一下概述。
- 平光伦汪智琼张玲石玉琴江高峰张双玲刘晙玭张志兵
