广东省科技计划工业攻关项目(5200512)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：于莉娜李新张庆玲丁彦青更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Tiam1基因慢病毒表达载体构建及其在HT29细胞中的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:构建Tiam1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒表达载体,观察其在人结直肠癌HT29细胞中的表达。方法:通过酶切Tiam1/C1199HA质粒获得Tiam1cDNA片段,并将其克隆到慢病毒载体表达质粒pCDF1-copGFP中,经酶切、测序鉴定。慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带Tiam1和GFP融合基因的重组慢病毒。取病毒上清感染人结直肠HT29细胞株,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白及免疫细胞化学检测Tiam1在靶细胞中的表达。结果:重组慢病毒质粒pCDF1-Tiam1-copGFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的Tiam1基因序列(NM_003253)完全一致。重组慢病毒质粒可高效转染293FT细胞,病毒包装效率为88.34%。收获慢病毒上清可高效感染HT29细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光,感染效率为55.89%,感染后靶细胞中Tiam1稳定高表达。结论:成功构建了携带Tiam1与GFP融合基因的慢病毒表达载体pCDF1-Tiam1-copGFP,并使目的基因在靶细胞中得到稳定表达,为进一步研究Tiam1基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。
- 于莉娜张庆玲李新丁彦青
- 关键词：TIAM1基因慢病毒载体基因转染
