家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金(SKLVEB2007KFKT012)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：张彦明唐青海侯勃朱晓娟康恺更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 稳定表达猪miRNA let-7c细胞株的建立及其对CSFV的调控作用被引量：1
- 2010年
- 【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片段,连接到表达载体pGenesil-1.1-dBm2上,构建重组质粒pGene-pre-let-7c,采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),经G418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验,检测CSFV的复制情况。用MTT比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因,并构建了pGene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染SUVEC细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调CSFV在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调CSFV的RNA复制水平。
- 张旭张彦明张倩程媛媛谭晓妮
- 关键词：猪瘟病毒MIRNA
- 猪血管内皮细胞中与猪瘟病毒相关microRNA的初步筛选被引量：4
- 2010年
- 本试验旨在筛选猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)内作用于猪瘟病毒(CSFV)的microRNA。通过构建CSFV3′和5′非翻译区(Untranslated region,UTR)的双荧光素酶报告基因载体,经生物信息学预测可能与CSFV相互作用的microRNA,然后瞬时共转染重组载体与microRNA的抑制物,最后通过发光检测仪测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了CSFV5′非翻译区(373 bp)和3′非翻译区(252 bp)的报告基因载体,并合成了4条预测出的microRNA(ssc-mi R-let7c、ssc-mi R-106a、ssc-mi R-18、ssc-mi R-139)的抑制物,共转染后发光检测仪检测到荧光素酶的活性被不同程度抑制。本研究发现microRNA作用位点主要在CSFV的3′-UTR,而且以上4种microRNA都对CSFV3′-UTR有不同程度的抑制作用,其中ssc-mi R-18的抑制作用比较明显。
- 侯勃张彦明朱晓娟康恺代晨唐青海
- 关键词：猪瘟病毒MICRORNA
