江苏省医学重点人才培养基金(RC2007061)
- 作品数：13 被引量：42H指数：4
- 相关作者：尤永平傅震刘宁张军霞赵鹏更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院昆山市第一人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省医学重点人才培养基金国家自然科学基金江苏省卫生厅医学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胶质瘤U87细胞培养上清诱导CD133^+内皮细胞血管生成及其可能的机制
- 2010年
- 目的:探讨胶质瘤U87细胞培养上清诱导CD133+内皮细胞血管生成及其可能的机制。方法:磁珠法分选脐血CD133+细胞,体外诱导为CD133+内皮细胞并以共聚焦显微镜加以鉴定。U87细胞培养上清作用于CD133+内皮细胞(以DMEM作用为对照),体外血管生成实验检测其体外血管生成,Transwell法检测其迁移能力,Western blotting检测CD133+内皮细胞中VEGFR-1、VEGFR-2与基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP-9)的表达,明胶酶谱检测MMP-9的活性。结果:脐血CD133+细胞体外诱导培养14d后,约90%的细胞呈Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双阳性,具有内皮细胞特性,鉴定为CD133+内皮细胞。与DMEM对照组相比,U87细胞培养上清可诱导CD133+内皮细胞血管生成[(40.7±3.3)vs(21.0±2.3),P<0.05],促进CD133+内皮细胞迁移[(0.60±0.04)vs(0.27±0.02),P<0.05]。U87细胞培养上清上调CD133+内皮细胞中VEGFR-2与MMP-9的表达(P<0.05),而VEGFR-1的表达基本不变;U87细胞培养上清还可增强CD133+内皮细胞中MMP-9的酶活性。结论:胶质瘤U87细胞培养上清通过上调CD133+内皮细胞中VEGFR-2与MMP-9的表达促进内皮细胞血管生成。
- 王颖毅骆慧张军霞刘宁尤永平傅震
- 关键词：胶质瘤内皮祖细胞CD133VEGFR
- CD133免疫磁珠分选脐血内皮祖细胞的培养及鉴定被引量：8
- 2008年
- 目的:建立具备高效增殖、血管生成与迁移能力的脐血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)分离培养鉴定方法。方法:应用免疫磁珠分选纯化脐血单个核细胞中的CD133+细胞,体外EGM-2MV培养液培养扩增,通过形态学、细胞表面标志及细胞功能鉴定EPCs,并与脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作比较。结果:EPCs分离培养7d左右开始出现小集落,21d左右集落扩大、相互融合,并呈现出典型铺路石样改变;培养14d左右,约90%的细胞免疫荧光Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双阳性,阳性率达90%。CD133和CD34阳性率从86.04%降至2.96%、90.88%降至2.99%,而CD31阳性率从1.12%升至99.88%。在增殖、血管生成与迁移能力上比较,EPCs明显优于HUVECs(P<0.05)。结论:通过CD133免疫磁珠分选脐血单个核细胞,可培养出具有高效增殖、血管生成与迁移能力的EPCs。
- 张军霞李瑞赵鹏石磊程子昊尤永平傅震
- 关键词：内皮祖细胞CD133免疫磁珠分选增殖血管生成
- MicroRNA-10a通过调控MMP的表达促进胶质瘤细胞侵袭被引量：3
- 2011年
- 目的:研究microRNA-10a(miR-10a)对人脑胶质瘤细胞系U87MG侵袭性的影响。方法:脂质体包被miR-10a反义寡聚核苷酸(miR-10a antisense oligodeoxynucleotide,miR-10a-anti-ODN),转染胶质瘤U87MG细胞,并设无义miRNA转染组和空白对照组,流式细胞术和荧光显微镜检测miR-10a-anti-ODN对U87MG细胞的转染效率,流式细胞术检测转染miR-10a-anti-ODN后U87MG细胞的凋亡和细胞周期,MTT法检测U87MG细胞的增殖,Transwell实验检测miR-10a-anti-ODN对U87MG细胞迁移和侵袭的影响;RT-PCR和Western blotting法分别检测U87MG细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-14 mRNA及蛋白的表达。结果:转染miR-10a-anti-ODN后,U87MG细胞的增殖、周期和凋亡无明显改变,U87MG细胞的侵袭[(87±7.1)vs(155±3.7)、(149±6.6)个细胞,P<0.05]和迁移[(78.0±5.2)vs(150.3±3.7)、(147.3±6.6)个细胞,P<0.05]能力明显下降,侵袭相关因子MMP-2、MMP-9、MMP-14的mRNA及蛋白表达水平也明显下降。结论:miR-10a通过调控MMP-2、MMP-9、MMP-14的表达促进胶质瘤U87MG细胞的侵袭,miR-10a可能是胶质瘤治疗的潜在靶点。
- 范立刚吴德刚孙立华王颖毅梅赞尤永平刘宁
- 关键词：反义寡聚核苷酸胶质瘤迁移基质金属蛋白酶
- 人脑胶质瘤中HIWI的表达及其意义
- 2010年
- 目的探讨HIWI在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性。方法收集具有病理明确分级的WHOⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤组织各10例,另取12例正常脑组织(来源于脑外伤行内减压术患者)作正常对照,用免疫组织化学染色、RT-PCR及Western blot检测HIWI在正常脑组织及各级胶质瘤组织中的表达水平。结果在胶质瘤组织中HIWI表达增高,与胶质瘤恶性程度呈正相关,且在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中表达水平显著强于Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤。结论 HIWI在胶质瘤组织中高表达,可能与胶质瘤的发生、发展密切相关。
- 孙关颜伟钱春发赵鹏张军霞王颖毅孙利华王伟杰鲁艾林刘宁傅震尤永平
- 关键词：神经胶质瘤
- Notch-1在人胶质瘤细胞系U251细胞中的邻分泌机制探讨
- 2009年
- 目的探讨Notch-1在人胶质瘤细胞系U251细胞中的邻分泌机制。方法用免疫荧光组织化学方法检测单个孤一和聚集相邻的两个U251细胞的Notch-1及配体delta-like-1的表达水平。封闭U251细胞的Notch-1受体,采用SYBR荧光实时定量PCR法检测Notch-1配体delta-like-1 mRNA在不同封闭时间组的表达水平。结果聚集相邻的U251细胞Notch-1及delta-like-1的平均荧光强度高于单个孤一的细胞。封闭后delta-like-1 mRNA的表达水平明显呈时间依赖性降低。结论在U251胶质瘤细胞中,Notch-1可能通过邻分泌机制促进相邻细胞Notch-1的表达,并影响其配体delta-like-1的表达。
- 钱进钱春发石磊颜伟傅震尤永平
- 关键词：NOTCH-1胶质瘤
- 靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达
- 2009年
- 目的构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础。方法根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响。结果重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%。结论成功构建了靶向miR-221的siRNA表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长。
- 赵鹏傅震尤永平陆小明鲁艾林刘宁
- 关键词：MIR-221RNAI
- 转染HSV-TK的内皮祖细胞的靶向血管新生治疗胶质瘤体内外实验被引量：3
- 2009年
- 目的 探讨转染单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase，HSV—TK）的内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）靶向血管新生及对胶质瘤的治疗作用。方法 将转染HSV-TK的EPCs和脐静脉内皮细胞、U87与U251胶质瘤细胞，以不同比例混合，经更昔洛韦（ganciclovir，GCV）作用，观察其旁观者效应。将转染HSV—TK的EPCs经尾静脉注入裸鼠皮下胶质瘤模型，观察各组肿瘤体积的变化，免疫组化检测各组中血管情况。结果 转染HSV—TK的EPCs对内皮细胞与胶质瘤细胞的旁观者效应，呈现时间依赖性与细胞比例依赖性。静脉注射转染后的EPCs，对裸鼠皮下胶质瘤生长具有明显抑制作用，并抑制血管生成。结论 转染HSV-TK的EPCs可能通过靶向血管新生来抑制胶质瘤生长。
- 张军霞赵鹏李瑞石磊程子昊尤永平傅震
- 关键词：单纯疱疹病毒胸苷激酶内皮祖细胞胶质瘤旁观者效应
- 骨桥蛋白与胶质瘤关系的研究进展
- 2009年
- 骨桥蛋白（OPN）是一种分泌型、黏附性的磷酸化糖蛋白，广泛分布于体内多种组织和细胞内。OPN在多种恶性肿瘤组织的表达明显上调。脑胶质瘤是一种低分化瘤，恶性度高，外科手术和其他辅助治疗都无法达到生物学切除或杀灭，残余的肿瘤细胞极易复发。近年来，随着分子生物学的发展及对胶质瘤研究的深入，发现OPN与胶质瘤的发生发展有着十分密切的关系。
- 吴绮鋆尤永平
- 关键词：骨桥蛋白胶质瘤
- 慢病毒介导的靶向骨桥蛋白的siRNA对人脑胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究骨桥蛋白（osteopontin，OPN）下调后对胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法在体外以慢病毒介导的OPN小干扰RNA（smallinterference，siRNA）感染胶质瘤细胞系U251细胞，实时PCR和Western印迹检测OPN表达。通过Transwell实验、流式细胞仪检测，观察OPN表达下调后对胶质瘤细胞侵袭和细胞凋亡的影响。结果慢病毒介导的OPNsiRNA感染能显著降低U251细胞0PNmRNA水平及蛋白表达，有效抑制U251细胞侵袭能力，并诱导其凋亡，0PNsiRNA感染组中Bcl-2、尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）、MMP-2和MMP-9明显减少，Bax显著增多。结论慢病毒介导的0PNsiRNA可显著抑制U251细胞的侵袭，并促进其凋亡。
- 颜伟钱春发石磊钱进傅震刘宁鲁艾林尤永平
- 关键词：骨桥蛋白小干扰RNA凋亡
- 骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHOⅡ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力。整合素α_vβ_3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI_3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI_3K/Akt信号转导通路。Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性。结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达。OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用。结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI_3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力。
- 钱春发颜伟赵鹏张军霞李瑞石磊孙关孙利华钱进傅震刘宁尤永平
- 关键词：骨桥蛋白质剪接体神经胶质瘤
