广东省自然科学基金(7300047)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：余细勇朱平郑少忆卢聪李运雄更多>>
- 相关机构：广东省人民医院广东省医学科学院广东省人民医院(广东省医学科学院)更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库的构建和分析被引量：1
- 2012年
- 目的:构建风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库。方法:外科手术治疗中取风湿性心脏病患者新鲜心耳组织,用QIAGEN试剂盒提取RNA,用逆转录酶合成cDNA第一链,用长距离PCR合成双链cDNA,SfiⅠ酶切cDNA后过柱分级收集,用T4 DNA连接酶重组连接入λTripl Ex2载体,最后用λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:构建了风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/mL,重组率为99%,81.25%外源重组片段大于1kb。结论:成功构建了高质量的风湿性心脏病患者心肌组织噬菌体表达文库,为风湿性心脏病的分子机制寻找新的研究策略奠定了实验基础。
- 李运雄孟锦绣朱平卢聪郑少忆余细勇
- 关键词：风湿性心脏病
- 免疫筛选获得风湿性瓣膜性心脏病的自身抗原THYN1
- 目的风湿性瓣膜性心脏病是风湿热继发心脏损害导致死亡的重要原因,A组乙型溶血性链球菌模拟心脏瓣膜组织蛋白分子达到免疫逃避的同时,也导致人类产生自身抗体造成心脏组织的免疫性损伤,这种被链球菌模拟了的自身抗原与自身抗体的长期作...
- 孟锦绣李运雄朱平林秋雄卢聪郑少忆余细勇
- 文献传递
- 风湿性心脏病自身抗原RHDAG1的获得与鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的探索用风湿性心脏病患者噬菌体表达文库构建和免疫筛选方法来研究风湿性心脏病的自身抗原候选分子。方法提取风湿性瓣膜性心脏病患者心肌组织总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成长链cDNA,用噬菌体载体构建表达文库,用风湿热患者血清免疫筛选该库,对筛选获得的自身抗原基因进行鉴定、生物信息学分析、体外表达、Western blotting鉴定和免疫反应结合性分析。结果成功构建了风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/ml,重组率为99%,81%外源片段大于1kb。通过免疫筛选方法获得了自身抗原RHDAG1,该自身抗原与人类角蛋白18同源,能与活动性风湿热患者血清和风湿性心脏病患者血清结合,而与体检健康人血清无结合。结论构建噬菌体展示文库方法可以有效地用于筛选和获得风湿性心脏病患者自身抗原;本研究提示自身抗原RHDAG1可成为风湿热和/或风心病的候选分子标志物。
- 孟锦绣李运雄朱平李玲卢聪郑少忆李广华余细勇
- 关键词：风湿性心脏病自身抗原分子标志物
- 人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库的构建及质量分析
- 2011年
- 目的:各种病因引起的心脏瓣膜纤维化是导致心脏瓣膜功能丧失的主要原因,样本来源有限和不可重获性是其分子机制研究的瓶颈。本研究旨在成功获取患者纤维化瓣膜的遗传信息物质,为探明瓣膜病变的分子机制提供直接证据。方法:心脏换瓣手术中取纤维化瓣膜组织,提取高质量RNA,用SMART技术合成cDNA第1链,再用长距离PCR合成双链cDNA,经Sfi I酶切后过柱分级收集长片段cDNA,经T4 DNA连接酶催化连接入λTriplEx2载体,最后经λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:成功构建了纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,原始文库滴度为8×109 pfu/L,重组率为99%,外源基因片段大小在500到3 000 bp之间,其中81.25%片段大于1 000 bp。结论:成功构建了高质量的人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,该文库的库容量足够代表人类基因的复杂性,高重组率能保障功能筛选的高效性,长片段更有助于全长基因的获得和表达。
- 孟锦绣李运雄朱平卢聪郑少忆余细勇
- 关键词：心脏瓣膜纤维化
- 角蛋白18是风湿性心脏病的自身抗原
- 目的风湿性心脏病是风湿热继发的最严重器官损害的结果,引起风湿热的A组乙型溶血性链球菌模拟心脏组织蛋白分子,导致外周血中的抗体在识别和清除病原体的同时也对心脏组织产生免疫性损伤,从而使这种自身免疫反应在自身抗体存在的情况下...
- 孟锦绣李运雄朱平林秋雄李玲卢聪郑少忆李广华余细勇
- 文献传递
