上海市科委重大科技攻关项目(05DZ19322)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 相关作者：曾溢滔李华黄淑帧颜昊严忠海更多>>
- 相关机构：上海交通大学上海市儿童医院卫生部更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛的3种单个早期胚胎中基因表达的差异
- 2009年
- 为建立哺乳动物单个早期胚胎中基因表达的分析方法,解决胚胎实验中取材困难的矛盾,本研究以牛体内受精胚(invivo cultured,IVC)、体外受精(in vitro fertilization,IVF)和体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)3种来源的7日龄囊胚作实验材料,通过单个胚胎直接裂解后进行逆转录结合随机引物指数扩增的方法富集相应cDNA。对克隆囊胚cDNA库中随机挑选的15个阳性克隆进行测序和EST分析。并运用特异性的引物,对哺乳动物胚胎发育的3个重要基因Nanog,Oct-4和Sox2的表达进行了扩增和表达检测。结果表明,在哺乳动物胚胎囊胚阶段,这3个维持细胞多能性的相关基因的表达都相当活跃;相对于体内胚和体外受精胚,克隆胚中这3种基因的表达明显偏低。本方法为牛植入前胚胎发育阶段特异性基因的筛选和基因表达模式的研究提供了有效的材料和技术途径。
- 严忠海颜昊周一叶赵祥杰卢全晟曾溢滔
- 关键词：植入前胚胎重编程体外受精体细胞核移植CDNA
- 慢病毒载体在转基因动物研制中的应用被引量：5
- 2007年
- 慢病毒载体用于转基因技术与传统的DNA微注射相比具有操作简单、整合效率高、成本低廉等优点。与非慢病毒类反转录病毒载体相比，LV具有转基因表达效率高、对细胞周期没有选择性等优点。正因为LV具有独特的优点近年来LV转基因技术迅猛发展起来，多种LV转基因动物也相继诞生，文章从LV优点、构建以及已获得的转基因动物制备方法研究入手，分析总结并提出了对未来的展望。
- 刘茵
- 关键词：慢病毒载体转基因动物甲基化
- 共培养体系中滋养层细胞对牛核移植胚胎早期发育的影响被引量：8
- 2007年
- 利用活体取卵(OPU)所得的卵母细胞与牛耳成纤维细胞构建牛体细胞核移植重构胚,并将所得的重构胚进行ACM(培养液)与不同滋养层细胞的共培养,分析不同滋养层细胞类型、传代次数、冻融处理对核移植胚胎体外发育的影响,探讨胚胎体外共培养中滋养层细胞的合适条件。结果表明:胎鼠成纤维细胞(MEF)培养组的囊胚率和胚胎细胞数(38.2%和135±2.1)显著高于牛颗粒细胞(GC)组(9.1%和101±4.6,P<0.05)和牛耳成纤维细胞(BAF)组(25.9%和115±3.1,P<0.05)。2～4代MEF细胞与胚胎共培养的效果(38.2%和135±2.1)明显好于原代MEF细胞(24.7%和108±3.1,P<0.05)或5～8代MEF细胞(22.8%和102±2.8,P<0.05),新鲜的MEF细胞比冻融处理后的MEF细胞培养效果好(38.2%vs.27.7%,135±2.1vs.110±1.7,P<0.05)。因此,用新鲜的2～4代MEF细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于牛核移植胚胎的早期发育。
- 伏静赵磊文管鹏飞李华黄英黄淑帧曾溢滔
- 关键词：共培养体系体细胞核移植
- 不同亚种牛卵母细胞克隆效率和胚胎移植效果分析被引量：2
- 2010年
- 在体细胞核移植(克隆)试验中,作为受体细胞的卵母细胞是制约克隆效率的重要因素之一。本文通过对鲁西黄牛和荷斯坦奶牛进行活体取卵(OPU)试验,并以两个不同亚种的卵母细胞分别作为受体细胞进行奶牛体细胞克隆和胚胎移植试验,经卵母细胞克隆效率和胚胎移植效果分析,探讨以鲁西黄牛代替荷斯坦奶牛作为卵母细胞的供体的可行性。结果显示,夏季鲁西黄牛OPU的效果更好,用鲁西黄牛卵母细胞构建的重构胚的融合率显著高于荷斯坦奶牛;鲁西黄牛卵母细胞形成的克隆胚移植后,其妊娠率、产犊率和活产率与荷斯坦奶牛相当;采用不同亚种克隆胚和不同类型受体牛互相组合进行胚胎移植,结果表明亚种内移植组妊娠率明显高于亚种间移植组,而且亚种内移植组非妊娠牛的返情时间也明显推后。以上结果说明,鲁西黄牛可以代替荷斯坦奶牛作为卵母细胞的供体和胚胎移植受体牛;不同亚种受体牛与克隆胚的适当组合可以显著提高胚胎移植的效果。本研究为以后开展不同亚种间克隆提供了可行性参考。
- 颜昊严忠海李华黄淑帧曾凡一曾溢滔
- 关键词：鲁西黄牛荷斯坦奶牛卵母细胞体细胞核移植胚胎移植
