博士科研启动基金(KY200610)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：朱爱华金亮刘景晶郑元林刘文涛更多>>
- 相关机构：徐州师范大学中国药科大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响。方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析分离纯化。在不添加佐剂的情况下以纯化的HSP65通过3次鼻黏膜免疫非肥胖型1型糖尿病模型动物(NOD)小鼠,每月采集小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测血清中抗体的产生,利用自动生化分析仪检测血糖浓度。结果:通过鼻黏膜免疫途径可成功诱导小鼠产生特异的抗HSP65抗体,组织病理学分析也显示HSP65通过鼻黏膜免疫能降低NOD小鼠胰腺病变的产生。结论:HSP65通过鼻黏膜免疫能预防NOD小鼠糖尿病的发生,证实了HSP65经鼻黏膜免疫能降低和自身免疫性糖尿病有关的炎症过程的严重性,对1型糖尿病的治疗提供了一个新的途径。
- 朱爱华金亮刘景晶刘美艳吕爱军郑元林
- 关键词：热休克蛋白鼻内胰腺炎
- 小鼠HSP60基因的克隆与表达条件的优化
- 2011年
- 目的:克隆小鼠热休克蛋白60(HSP60)基因,在大肠杆菌中表达,并进一步对其表达条件进行优化。方法:采用RT-PCR技术克隆出非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠HSP60的cDNA序列。构建重组表达载体pET28a-HSP60,以其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),在不同的菌体浓度、不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间以及不同温度条件下诱导,检测重组蛋白的表达情况。结果:获得一个含有1 721bp的cDNA的片段,重组蛋白HSP60在E.coli BL-21(DE3)中的最佳表达条件是菌体密度A600nm为0.6,诱导时间为5h,诱导物(IPTG)浓度为4mmol/L,诱导温度为35℃,重组蛋白大小约为60kD。结论:成功克隆了小鼠HSP60基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,为重组蛋白的分离纯化及进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 朱爱华夏文静黄赛男季卫丹吕爱军
- 关键词：热休克蛋白60克隆大肠杆菌
- P277多肽的表达、纯化及初步药效学分析被引量：2
- 2007年
- 通过PCR方法得到P277多肽基因,插入到含门冬酰胺酶C端第199~326氨基酸残基片段的后面,形成融合蛋白,中间预留酸水解位点,并在P277多肽和融合蛋白之间加入一段碱性序列,构建pET28AnsB-C-KR-P277高效表达载体。克隆的基因在大肠杆菌中高效表达,通过Triton X-100洗涤、乙醇分级沉淀纯化融合蛋白AnsB-C-KR-P277,酸水解后经等电点沉淀去除杂蛋白,再经阴离子交换柱层析,进一步分子筛脱盐,可得到纯化的目的多肽P277。这种多肽生产平台,为多肽生物合成提供了一个很好的方法。纯化后的P277免疫型糖尿病模型动物NOD(non-obese diabetic)小鼠,可明显降低NOD小鼠自发性糖尿病的产生。
- 朱爱华刘文涛鲁勇金亮王宇刘景晶
- 关键词：纯化血糖浓度
- 重组热休克蛋白65对NOD小鼠糖尿病的预防作用研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究重组热休克蛋白65对NOD小鼠糖尿病发生的预防作用,评价其对人1型糖尿病的作用。方法通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达。利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析分离纯化重组蛋白HSP65。在没有任何佐剂存在的情况下使用HSP65免疫非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠,通过三次腹腔注射,每月收集被免疫动物的血清,血糖浓度用自动生化分析仪测定。结果HSP65免疫组小鼠血糖平均值及糖尿病的累积发病率和对照组相比均有显著差异(P<0.01)。结论重组蛋白HSP65对NOD小鼠糖尿病的发生有很好的预防作用,可以进一步研究开发这种免佐剂1型糖尿病疫苗。
- 朱爱华刘景晶刘文涛鲁勇金亮吴洁
- 关键词：热休克蛋白1型糖尿病疫苗血糖
- β分泌酶原核表达载体的构建、表达及融合蛋白纯化
- 2009年
- 目的构建小鼠β分泌酶原核表达载体并诱导其表达和纯化,为进一步研究β分泌酶的作用奠定基础。方法根据基因文库中小鼠β分泌酶基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增到β分泌酶的cDNA片段,克隆进原核表达载体pET-28 a中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),测序鉴定后,通过IPTG诱导表达出目的蛋白,经亲合层析纯化。结果从小鼠的脑组织RNA中扩增出特异的β分泌酶基因片段长1 506 bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实重组载体pET28 a-BACE构建正确,表达融合蛋白分子量约为55 kD,经镍离子亲合柱层析纯化获得电泳级纯度的目的蛋白。结论在大肠杆菌中获得了小鼠β分泌酶的高效表达,为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。
- 朱爱华李敬陆军钱进郑元林
- 关键词：Β分泌酶大肠杆菌融合蛋白
