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马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立被引量：6: 2014年; 本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。; 杨夷平刘建华冉多良许全圆李娜加尔肯; 关键词：环介导等温扩增技术

五味消毒饮对炎症模型的作用研究被引量：7: 2014年; 目的:探讨五味消毒饮水煎液对乳腺上皮细胞炎症模型的作用及对大肠杆菌感染小鼠的保护作用机制。方法:将96孔板细胞分为对照组、模型组、治疗组和中药组。将五味消毒饮水煎液按终浓度0.2 g/mL、0.4 g/mL和0.8 g/mL添加到乳腺上皮细胞炎症模型中,观察细胞形态,用MTT法检测各组细胞OD值;将24只小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组8只,将1 g/mL的五味消毒饮水煎液腹腔注射于炎症模型小鼠,观察小鼠临床症状,以ELISA法检测血清白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。结果:五味消毒饮水煎液0.8 g/mL使乳腺上皮细胞固缩、脱壁;0.2 g/mL对细胞炎症模型有显著的保护作用,细胞形态与对照组相同。五味消毒饮水煎液(1 g/mL)对小鼠大肠杆菌感染有保护作用,72 h内,对照组饮水、摄食均衡,精神状态良好,零死亡;模型组饮水、摄食减少,精神萎靡不振,死亡7只,治疗组死亡1只。与对照组比较,模型组小鼠血清IL-10显著升高(P<0.05);治疗组IL-10浓度较模型组低,与对照组比较无显著差异,五味消毒饮有降低炎症小鼠血清IL-10浓度的趋势。结论:五味消毒饮水煎液0.2 g/mL对细胞炎症模型有显著的保护作用,1 g/mL对小鼠大肠杆菌感染有保护作用,且能降低炎症小鼠血清IL-10浓度,促进小鼠免疫机能发挥作用。; 谷静娟赵璐厉世伟郭晓迟姗姗吴忠洋况玲; 关键词：五味消毒饮乳腺上皮细胞细胞模型炎症模型 IL-10

马疱疹病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：9: 2016年; 为建立一种检测马疱疹病毒抗体间接ELISA方法,采用纯化后的马疱疹病毒1型和马疱疹病毒4型g D蛋白作为抗原,经方阵滴定法优化ELISA反应条件,并对该方法进行特异性和重复性试验。结果显示,使用此方法检测其他马常见病毒病阳性血清均为阴性;组内、组间变异系数均小于10%。采用建立的方法与国外商品化的马疱疹病毒诊断试剂盒对送检的300份马血清进行检测比较,两者符合率为95%。结果表明,本次试验建立的间接ELISA方法可以用来检测马疱疹病毒抗体,为马鼻肺炎的防控工作提供技术支撑。; 宋焕堂孙建华杜润慈刘建华冉多良; 关键词：马鼻肺炎间接ELISA

新疆伊犁地区部分马病血清学调查被引量：9: 2016年; 为了解新疆伊犁地区马群马流感病毒(equine influenza virus)、马疱疹病毒(equine herpesviruses)以及马沙门菌(Salmonellosis equinum)、马链球菌(Streptococcus equi)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验及血凝抑制试验对采自新疆伊犁地区7个马场的277份马血清进行抗体水平检测。结果显示:4种病原中,沙门菌血清抗体阳性率最高26.71%(74/277),马疱疹病毒最低15.16%(42/277);各马场之间马流感病毒、马疱疹病毒,以及沙门菌、马链球菌抗体阳性率差异性极显著(P<0.01);不同马场之间马沙门菌和马链球菌双抗体阳性率差异性极显著(P<0.01);不同马场之间马鼻肺炎和马流感双抗体阳性率差异性极显著(P<0.01)。结果表明:新疆伊犁部分马群存在不同程度的马流感病毒、马疱疹病毒、马沙门菌以及马链球菌的感染。此次调查数据可为新疆地区部分马病的防控工作及马产业的健康发展提供参考。; 沙燕苏战强杜润慈冉多良; 关键词：马流感病毒沙门菌

一例纯种雌马驹屈腱挛缩病的诊疗被引量：1: 2015年; 本文结合临床所遇一雌性马驹屈腱挛缩病例,对其发病情况、诊断要点、中西药治疗方法和预防措施进行了论述,以供同行在临床实践中参考。; 马玉辉李海吕燕赵海利芦文圆况玲买占海

TLRs介导的信号通路在马链球菌感染RAW264.7细胞中的作用被引量：6: 2016年; 为探究Toll样受体(TLRs)介导的信号通路在马链球菌马亚种(S.equi)感染小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用,收集S.equi感染后不同时间点的RAW264.7细胞,提取总RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞Toll样受体1、2、6(TLR1、TLR2、TLR6)、接头蛋白骨髓分化蛋白88(MyD88)及细胞因子IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染RAW264.7细胞后6h时,TLR1、TLR2、TLR6与MyD88mRNA水平均较对照组没有显著差异(P>0.05);感染后12h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达量未出现明显上升(P>0.05),而MyD88mRNA水平极显著升高(P<0.01);感染后24h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达水平出现极显著升高(P<0.01),MyD88 mRNA表达没有显著变化(P>0.05),且IL-10和IL-12mRNA水平与对照组相比极显著升高(P<0.01),IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平均极显著下降(P<0.01)。结果表明,TLRs介导的信号通路参与S.equi感染RAW264.7细胞的免疫应答反应。; 杜润慈刘建华史茜付强冉多良; 关键词：RAW264.7细胞 TOLL样受体细胞因子

马腺疫链球菌FNE基因的克隆及原核表达被引量：2: 2014年; 采用PCR方法从马腺疫链球菌新疆分离株中扩增FNE基因片段,克隆至pMD19-T载体。利用分子生物学软件分析测序结果,将FNE截短基因亚克隆至原核表达载体pET-30a中,转化到大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导FNE重组蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western blot法分析蛋白表达及其反应原性。序列分析显示,其与GenBank收录的马腺疫链球菌4047(登录号YP002747216)核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99%。采用PCR法扩增到675bp的FNE截短基因片段构建重组表达载体获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析在46ku处出现明显条带,Western blot分析显示具有反应原性。成功克隆和表达了马腺疫链球菌的FNE截短基因,为重组FNE蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 徐全圆刘建华苏艳加尔肯王世民冉多良; 关键词：原核表达

马链球菌对树突状细胞Toll样受体和MyD88及细胞因子mRNA表达的影响被引量：1: 2016年; 为探究马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)对小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)TLR1、TLR2、TLR6、MyD88、IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA表达的影响,用GM-CSF、IL-4细胞因子刺激小鼠骨髓细胞使其诱导分化成未成熟的BMDCs,感染S.equi后16、20、26h,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测感染组及未感染组细胞TLRs、MyD88和细胞因子mRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染BMDCs后16、20、26h,TLR1、TLR2、TLR6、MyD88mRNA的表达量均显著或极显著的高于未感染组(P<0.05或P<0.01)。S.equi感染DCs后16、26h,IL-1的分泌量较未感染组没有变化(P>0.05),IL-10、TNF-α的分泌量显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01)。IL-6在S.equi感染DCs后16h的分泌量显著增加(P<0.05),但感染后26h无显著变化(P>0.05)。IL-12在S.equi感染DCs后16h的表达没有变化(P>0.05),但感染后26h分泌量有所增加(P<0.05)。说明S.equi具有调节DCs TLRs、MyD88和细胞因子表达的能力,从而介导机体的免疫应答反应。; 杜润慈冉多良李静付强刘建华; 关键词：树突状细胞 TOLL样受体细胞因子

马链球菌马亚种FNEB蛋白的截短表达及其免疫保护性研究被引量：12: 2015年; 为研究马链球菌马亚种FNEB蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法从马链球菌马亚种新疆分离株中扩增FNEB基因部分片段,克隆于原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约60 ku,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以马链球菌马亚种新疆分离株进行攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为65%。本研究克隆了马链球菌马亚种的FNEB截短基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供较好的保护,为重组FNEB蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。; 徐全圆石明杨夷平李娜刘建华加尔肯冉多良; 关键词：原核表达

新疆伊犁部分地区马鼻肺炎血清学调查被引量：6: 2016年; 为了解新疆伊犁部分地区马鼻肺炎的流行情况,应用间接ELISA法对采自新疆伊犁尼勒克县、新源县的907份马血清进行抗体检测。结果表明：尼勒克县422份马血清中有136份为阳性,新源县485份马血清中有155份为阳性,两个县马鼻肺炎阳性率均为32%;各年龄段马匹都可发病,且阳性率均在30%~40%之间,差异不显著（P〉0.05）。说明新疆伊犁部分地区马鼻肺炎流行。; 杜润慈刘建华李静冉多良; 关键词：血清学调查间接ELISA

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