国家高技术研究发展计划(2007AA02Z115)
- 作品数：11 被引量：18H指数：2
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- GST-G3BP Domain 1～5原核表达质粒的构建及其表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒,并在大肠杆菌中稳定表达。方法:PCR扩增G3BP Domain1～5片段,利用限制性内切酶EcoRI和NotI将其连接至载体pGEX-4T-1,将连接产物转化大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序。将转化正确的大肠杆菌过夜培养,IPTG诱导融合蛋白表达,immobilized Glutathione beads钓取目的蛋白。结果:G3BP Domain1～5片段均成功连接至载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的融合蛋白。结论:GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒构建成功。
- 葛林何津岩邵洁东莉洁方建飞李晓东杨洁
- 关键词：G3BP质粒构建DOWN
- 重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达被引量：2
- 2008年
- 目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoRI和BamHI双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒。将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段。(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)p100 cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒。(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。
- 何津岩东莉洁葛林赵钢邵洁陆燕欣李晓冬姚智杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- U5 snRNP在前体mRNA剪接加工中的作用
- 2008年
- 前体mRNA的剪接是基因表达过程中的关键一步,发生在基因的转录之后与蛋白合成之前。在由前体mRNA剪接加工而形成成熟mRNA时,需要将转录本中的内含子切除,因为它会干扰基因的表达。前体mRNA的剪接发生在细胞核中,是在一个大的RNA与蛋白质的复合体即剪接体的催化下完成的。复合体中含有U1、U2、U5,二聚体形式的U4/U6小核RNA(snRNA)和一些小核核糖核蛋白(snRNP)。U5snRNP特异蛋白包括hPrp8,hSnu114(aGTPase),hBrr2(aDExH/Dboxhelicase)和Prp28等。Prp8构成剪接体的催化核心,hSnu114可避免剪接复合体过早的活化。因此,U5snRNP在剪接体聚集过程和前体mRNA的剪接反应中发挥重要作用。
- 李晓冬杨洁
- 关键词：前体MRNA剪接
- 重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达
- 2011年
- 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。
- 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁
- 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类HELA细胞
- YD383和YD439对IL-4诱导的BJAB细胞CD23表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:初步探讨2种化合物YD383、YD439对JAK/STAT6信号传导通路的抑制机制。方法:将不同剂量的化合物YD383和YD439加入对数生长期的BJAB细胞作用30min,终浓度为20μg/L的白细胞介素(IL)-4共同孵育3h后,收集细胞并加入PE标记的鼠抗人CD23抗体,流式细胞仪检测各细胞群体CD23分子的表达情况。结果:化合物YD383和YD439均能降低由IL-4诱导的BJAB细胞CD23分子的表达,且随着化合物剂量的增大,CD23分子的表达水平逐渐降低。2种化合物各自不同的剂量组间CD23分子表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:化合物YD383和YD439对IL-4诱导的CD23分子的表达均有明显的抑制作用,并且具有剂量依赖性。
- 笪宇蓉邢军董学易宋春华段宏泉杨洁
- 关键词：蛋白酪氨酸激酶类信号传导白细胞介素4
- Tudor-SN蛋白TSN结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达
- 2011年
- 目的：研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能，构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ一Ⅳ）。方法：以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增出目的基因，将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2载体连接，从而构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（I-IV）。将构建成功的重组质粒用脂质体法转染HeLa细胞，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况，Western印迹检测融合蛋白的表达。结果：对重组质粒进行双酶切鉴定可见Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）的cDNA片段；脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）。结论：真核pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN（Ⅰ～Ⅳ）重组质粒构建及表达成功。
- 钱宝鑫高星杰朱梦瑜杨震霞宋娟段中潮邵洁杨洁
- 关键词：DNA结合蛋白质类质粒重组融合蛋白质类
- 医学免疫学研究中激光共聚焦显微镜的应用被引量：7
- 2008年
- 激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope．LSCM）在普通光学显微镜的基础上对成像原理作了改进，加装了激光扫描装置，同时利用计算机的图像处理技术，把光学成像的分辨率提高了30％～40％，是光学显微镜发展历史上的重大突破。与传统的光学显微镜相比，它能产生真正具有三维清晰度的图像，由于采用了点光源代替场光源，使探测点与照叽点共轭，有效抑制了同一聚焦平面上的杂散荧光，抑制了来自非焦平面上的荧光，使探向分辨力比普通光学显微镜明显升高．并具有深度识别力即纵向分辨力．对细胞可行无损伤的光学切片。
- 张馨予李晓眠杨洁
- 关键词：免疫细胞免疫分子激光共聚焦显微镜CA^2+凋亡
- 重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达被引量：3
- 2011年
- 目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain(1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达。
- 朱梦瑜高星杰钱宝鑫葛林赵虹赵秀娟杨洁
- 关键词：绿色荧光蛋白质类质粒重组融合蛋白质类
- 人类P100蛋白表达抑制稳定株的建立及其对HeLa细胞周期的影响被引量：2
- 2008年
- 目的构建针对人类P100(hP100)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒,转染后筛选P100表达抑制的稳定细胞株并鉴定其表达情况;同时检测其对细胞周期的影响。方法设计针对hP100基因的siRNA序列,构建pGenesil-shRNA-hP100质粒(smallhairpinRNA,shRNA,小发夹RNA),经测序鉴定后转染入宫颈癌细胞HeLa;经G418筛选出稳定株;Western印迹检测稳定株之抑制率。流式细胞术检测hP100蛋白表达抑制对细胞周期的影响。结果成功构建了针对hP100的siRNA质粒,并用之筛选出hP100蛋白表达抑制的稳定株,瞬时转染及稳定株hP100表达明显降低。流式细胞术显示抑制hP100蛋白表达使G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例降低。结论RNAi(RNA interference,RNA干扰)可持续稳定地抑制人类P100蛋白的表达,人类P100蛋白表达抑制对细胞周期有调节作用。
- 何津岩葛林邵洁赵钢东莉洁方建飞姚智杨洁
- 关键词：RNA干扰细胞周期
- 基因转录与pre-mRNA剪接的偶联蛋白被引量：1
- 2008年
- 真核基因的表达是一个复杂的过程,包括转录、pre-mRNA剪接、翻译等步骤。其中转录和pre-mRNA的剪接是基因表达中的两个重要环节,它们都要通过复杂的蛋白复合物来执行功能。目前研究发现这两个过程并不是绝对独立的,而是偶联在一起同时进行的。多种蛋白的偶联作用将二者联系在一起。RNA聚合酶Ⅱ、SKIP、SMN以及新近发现的人类P100蛋白不仅参与基因转录调节,同时它们在剪接加工中也具有相应的作用。
- 步天栩杨洁姚智
- 关键词：转录剪接RNA聚合酶
