上海市自然科学基金(04ZR14040)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 金黄色葡萄球菌低分子质量双特异性磷酸酶sL MWDSP的表达、纯化及性质被引量：1
- 2006年
- 双特异性磷酸酶是酪氨酸磷酸酶家族中的一员,它参与生物体内信号转导、生长调控、新陈代谢等许多基本的生理活动.金黄色葡萄球菌的低分子质量双特异性磷酸酶sLMWDSP(low molecular weight dual-specificityphosphatase,Staphylococcus aureus)基因从金黄色葡萄球菌cDNA库中克隆,并在大肠杆菌中表达.高纯度的sLMWDSP用亲和层析的方法纯化得到.酶学性质研究表明:sLMWDSP催化对硝基苯磷酸(-pnitrophenyl phos-phate,pNPP)水解反应的最适pH值为6.7,最适温度为35℃,且该酶的活性不依赖于金属离子.磷酸酶通用抑制剂岗田酸(Okadaic acid)、EDTA对sLMWDSP几乎没有抑制作用,但钒酸钠能明显地抑制该酶的活性.sLMWDSP对pSer/Thr以及pTyr的寡肽均有去磷酸化作用,这说明sLMWDSP是一个新的双特异性磷酸酶.
- 郭伟伟倪晓华李继喜郑眉顾星季朝能
- 关键词：金黄色葡萄球菌磷酸酶活性
- 血管生成抑制因子arresten克隆及功能的初步研究
- 2007年
- 血管生成抑制因子arresten是血管生成及肿瘤生长抑制物.研究发现,将arresten基因重组于质粒pGEX4T1转化入大肠杆菌BL21并用IPTG诱导蛋白表达,可获得分子量为45kDa的目的蛋白条带,arresten蛋白多数以包涵体形式存在,也有可溶蛋白存在于菌裂解液的上清,可溶蛋白可由Sepharose 4B凝胶柱亲和层析柱纯化.在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验中,arresten基因可溶蛋白被证实抑制新生血管生成的效果较好.
- 王鑫陈佩林倪晓华曹根涛周丹
- 关键词：质粒构建
- 金黄色葡萄球菌sPP2C的克隆、表达及性质研究
- 2007年
- 从金黄色葡萄球菌基因文库中克隆了一条新的双特异性磷酸酶,命名为sPP2C(protein phosphatase 2C,Staphylococcus aureus).sPP2C基因具有741个碱基,编码的蛋白有247个氨基酸,具有一个蛋白磷酸酶2C的催化结构域.sPP2C的分子量为26.1kD,等电点为4.95.在E.Coli.Rossetta中表达蛋白sPP2C.高纯度的sPP2C用亲和层析的方法纯化得到.酶学研究结果表明:sPP2C对磷酸酶的通用底物硝基苯磷酸(p-nitrophenyl phosphate,pNPP)不起作用,而与pSer/Thr和pTyr的寡肽均有去磷酸化作用.这些实验结果说明sPP2C是一个新的双特异性磷酸酶.
- 郭伟伟倪晓华
- 关键词：PNPP磷酸酶活性
- 端粒酶抑制剂被引量：2
- 2006年
- 端粒酶被激活被认为是发生恶性肿瘤的主要因素,其激活及表达程度与肿瘤的发生和转移密切相关,因此端粒酶是肿瘤靶向治疗的理想靶点。研究和开发端粒酶抑制剂将为肿瘤治疗揭开新的篇章。端粒酶全酶复合物有很多可以做抑制剂的靶点,包括hTR(端粒酶RNA成分)、hTERT(端粒酶逆转录催化亚单位)、引物锚定位点、全酶的组装和那些招募端粒酶到端粒的因子。
- 郭伟伟王保华
- 关键词：端粒酶HTRHTERT
- 人CREB4转核机制的初步研究
- 2007年
- cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding proteins,CREB)是一个哺乳动物转录因子家族,通过cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)调节cAMP和钙离子依赖性基因的表达.CREB4是CREB转录因子家族的一员.经酵母双杂交筛选人胎脑文库发现CREB4215-279aa可能与核转运因子kayopherinα2相互作用,提示karyopherinα2可能参与CREB4的跨膜转运过程.亚细胞定位结果显示,CREB4全长定位于细胞质,而缺失C端假定转膜结构域的CREB41-279aa蛋白则转移至细胞核内.荧光共定位进一步显示,CREB4和karyopherinα2共定位于细胞质中,CREB41-279aa和karyopherinα2共定位于细胞核中.结果提示C端被切除之后,CREB4被karyopherinα2转运到核内发挥转录作用.
- 刘永强倪晓华周丹王鑫郭伟伟
- 关键词：CREB4酵母双杂交
