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辽宁省科学技术计划项目(2009408001-1)

作品数：3 被引量：3H指数：1
相关作者：杨葳郑志红赵越郭晓冲秦英更多>>
相关机构：中国医科大学更多>>
发文基金：辽宁省科学技术计划项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 3篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇细胞
  • 3篇MYC
  • 3篇NIH3T3...
  • 3篇PCDNA3...
  • 3篇DJ-1
  • 2篇NIH3T3
  • 1篇蛋白
  • 1篇凋亡
  • 1篇增殖
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇真核表达载体...
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇帕金森
  • 1篇帕金森氏病
  • 1篇转移酶
  • 1篇细胞增殖
  • 1篇细胞增殖和凋...
  • 1篇谷胱甘肽

机构

  • 4篇中国医科大学

作者

  • 3篇张梅英
  • 3篇郑志红
  • 3篇杨葳
  • 2篇于萌
  • 2篇王惟
  • 2篇徐影琪
  • 2篇秦英
  • 2篇郭晓冲
  • 2篇赵越
  • 1篇黄华亮
  • 1篇刘佳

传媒

  • 1篇中国医科大学...
  • 1篇中国比较医学...
  • 1篇实验动物与比...
  • 1篇第十届中国实...

年份

  • 3篇2012
  • 1篇2011
共 3 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组载体构建及其对NIH3T3细胞增殖和凋亡研究
目的 构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础.方法 采用突变试剂盒将D...
张梅英徐影琪王惟赵越杨葳于萌郭晓冲秦英郑志红
关键词：DJ-1NIH3T3细胞
GST-Fank1融合蛋白表达载体构建及表达纯化的研究
2011年
目的研究转录因子Fank1与GST融合蛋白原核表达载体的构建和表达。方法根据Fank1基因的DNA序列,经引物设计软件Primer Premier 5.0优化设计出上下游引物(Ⅰ,Ⅱ),同时在5′端引入BamHⅠ酶切位点,3’端引入SalⅠ酶切位点。以pdsRED-Fank1质粒为模板进行PCR扩增Fank1目的片段,经限制性内切酶酶切后连接到原核表达载体pGEX4T-2,构建成pGEX4T-2-Fank1原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导进行目的蛋白表达。结果经菌液PCR、电泳分析及测序证明成功构建了Fank1融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹显示,相对分子量为43 kDa的蛋白条带,与预期一致。结论成功构建了pGEX4T-2-Fank1原核表达载体,并在原核细胞中有表达,为进一步研究转录因子Fank1的功能奠定了基础。
黄华亮杨葳刘佳郑志红
关键词：融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶
pcDNA3.1/myc-His-DJ-1^(M26I)重组载体构建及其对NIH3T3细胞增殖和凋亡研究被引量：3
2012年
目的构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础。方法采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,并采用脂质体介导的方法分别将其转染入NIH3T3细胞,500μg/mL G418压力筛选稳定克隆,对2种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinV-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测。结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P<0.05),转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测表明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞(P<0.05)。结论成功构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1 M26I重组表达载体,成功筛选出稳定表达人DJ-1及DJ-1 M26I的NIH3T3细胞。DJ-1 M26I基因突变更易导致NIH3T3细胞的凋亡。
张梅英徐影琪王惟赵越杨葳于萌郭晓冲秦英郑志红
关键词：DJ-1NIH3T3细胞凋亡
pcDNA3．1／myc-His-DJ-1^M26I真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞中表达
2012年
目的构建pcDNA3．1／myc-his-DJ-1和pcDNA3．1／myc-his-DJ-1^M26I重组表达载体，为进一步研究DJ-1^M26I基因的功能及建立转基因动物模型奠定基础。方法采用突变试剂盒将第26位氨基酸进行突变，分别构建pcDNA3．1／myc-his—DJ-1和pcDNA3．1／myc-his-DJ-1^M26I重组表达载体，采用脂质体转染的方法分别将pcDNA3．1／myc-his-DJ-1和pcDNA3．1／myc—his-DJ-1^M26I质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆，对获得的2种转染细胞在DNA水平、转录水平和蛋白质水平鉴定。结果pcDNA3．1／myc-his-DJ-1和pcDNA3．1／myc-his—DJ-1^M26I质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后，经PCR检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆，RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测，结果均证明外源插入基因的表达，MTT实验结果初步证明转染DJ-1^M26I基因的NIH3T3阳性细胞组增殖速率低于正常NIH3T3细胞组（P〈0．05）。结论成功构建pcDNA3．1／myc-his-DJ-1和pcDNA3．1／myc-his-DJ-1^M26I重组表达质载体。
张梅英王惟徐影琪赵越杨葳于萌郭晓冲秦英郑志红
关键词：DJ-1NIH3T3细胞帕金森氏病
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