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端粒酶hTERT基因siRNA表达质粒的构建和鉴定被引量：1: 2005年; 目的:构建含人端粒酶逆转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因不同位点的一系列siRNA真核表达质粒mU6-hTERT1～5,为以端粒酶为靶点的基因治疗鼻咽癌研究奠定基础。方法:将人工合成的针对hTERT基因4个不同位点和1个混乱序列的正反链DNA序列经基因重组定向克隆插入到真核表达质粒载体mU6中,通过PCR检测确定重组结果。根据260nm处紫外红吸收值计算重组质粒的浓度。结果:各对DNA序列均按正确方向插入pmU6质粒,纯度和浓度均符合实验要求。结论:成功构建成了含人端粒酶hTERT基因4个不同位点的siRNA真核表达质粒。; 吴斌华李祥勇梁统唐旭东周克元; 关键词：端粒酶逆转录酶质粒人端粒酶逆转录酶 HTERT基因真核表达质粒 DNA序列

利用siRNA阻抑survivin基因表达诱导乳腺癌细胞系MCF-7细胞凋亡的研究(英文)被引量：19: 2005年; 背景与目的:survivin属IAP基因家族成员,表达于多种肿瘤组织中,能促使细胞逃避凋亡,并促进细胞的异常有丝分裂。本研究旨在探讨敲除survivin基因后,癌细胞的增殖和凋亡情况。方法:利用RNAi阻抑人乳腺癌细胞内survivin基因的表达,RT-PCR和Westernblot法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:survivinsiRNA转染组,survivin基因表达水平与未转染组比较下调了64%。随着siRNA浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,200nmol/L剂量组细胞增殖抑制率最高,可达60.9%。不同浓度的siRNA可不同程度地诱导细胞凋亡,200nmol/L剂量组凋亡率最高,可达29.0%。结论:survivinsiRNA有可能成为治疗乳腺癌的新药物。; 李继霞周克元梁统张月飞; 关键词：细胞凋亡 RNA干涉小干扰RNA

质粒表达的短发夹状RNA特异性抑制鼻咽癌细胞的增殖: 2005年; 目的　观察pmU6 sibclD重组体在细胞内表达的bcl xL短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)能否特异地抑制人鼻咽癌CNE 2Z细胞的增殖。方法　将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到人鼻咽癌CNE- 2Z细胞株、卵巢癌HO 8910细胞株和正常人类肝脏L- O2 细胞株中,流式细胞仪检测转染率, MTT 比色法检测细胞的生长抑制率。结果　bcl xLshRNA能特异地抑制CNE 2Z细胞株的生长增殖,而对正常人类肝脏细胞株的生长增殖和HO 8910 细胞中的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)的表达无抑制作用。结论　pmU6 sibclD重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能特异性抑制鼻咽癌细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术运用于肿瘤的基因治疗提供一定的理论依据。; 刘芳何承伟周克元张月飞; 关键词：RNA干扰转染短发夹状RNA BCL-XL

BI-1抑凋亡基因siRNA表达质粒的构建和鉴定: ＜正＞大量研究表明,肿瘤细胞之所以出现永生化,其中一个很重要的原因是调节细胞凋亡的一系列重要基因发生了异常。其中,Bax inhibitor-1（BI-1）是近年发现的一种凋亡抑制因子,它是受Bcl-2和Bax调控的细胞...; 周克元张美红吴斌华; 文献传递

进化中保守的凋亡抑制因子Bax inhibitor-1被引量：7: 2007年; 张美红周克元; 关键词：细胞凋亡 BAX BCL-2

以质粒为载体的RNAi技术剔降鼻咽癌细胞hTERT基因: ＜正＞鼻咽癌是我国华南地区的一种高发恶性肿瘤。目前鼻咽癌的治疗主要采用化疗和放疗相结合的综合疗法,但疗效和预后均不理想。随着对鼻咽癌研究的不断深入,发现它在发生、发展过程中与基因遗传性也有密切关系。所以,从基因水平对鼻咽...; 周克元吴斌华

以质粒为载体的RNAi技术诱导鼻咽癌细胞发生凋亡: ＜正＞鼻咽癌是我国华南地区的一种高发恶性肿瘤,它在发生、发展过程中与基因遗传性存在非常密切关系。大量研究表明,肿瘤细胞之所以出现永生化,其中一个很重要的原因是调节细胞凋亡的一系列重要基因发生了异常。其中,参与调节细胞生长...; 吴斌华周克元; 文献传递

bcl-x_L短发夹状RNA诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡(英文)被引量：13: 2005年; 背景与目的:实验证明bcl-xL 在鼻咽癌细胞株CNE-2Z 中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展、转移及治疗过程中产生耐药等方面发挥重要作用。本研究拟探讨bcl-xL 短发夹状RNA (shorthairpin RNA ,shRNA )诱导CNE-2Z 细胞凋亡的作用。方法:把表达bcl-xL shRNA 的重组质粒pm U6-RNAi转染到CNE-2Z细胞中,用荧光染色和流式细胞术等方法检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polym erase chain reaction,RT-PCR )检测bcl-xL、bcl-2、survivin和caspase-3的m RNA 表达水平;用W estern blot检测Bcl-xL、Caspase-3和P53的蛋白表达水平。结果:流式细胞术检测发现,pm U6-RNAi重组质粒作用24h 后,细胞出现明显的凋亡峰;H oechst33258单染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩和核断裂;RT-PCR 分析pm U6-RNAi重组质粒作用细胞后明显下调了bcl-xL、bcl-2和caspase-3的m RNA 表达水平, 对survivin 的m RNA 表达水平无影响;W estern blot分析pm U6-RNAi质粒作用细胞后明显下调了Bcl-xL、Caspase-3的蛋白表达水平,而大幅度上调了P53的蛋白表达水平。结论:bcl-xL shRNA 可诱导CNE-2Z 细胞凋亡;CNE-2Z 细胞的凋亡可能与bcl-2、caspase-3和p53有着密切的关系;质粒表达的bcl-xL shRNA; 何承伟刘芳张月飞梁统周克元; 关键词：鼻咽肿瘤短发夹状RNA BCL-XL 细胞凋亡

siRNA介导的Bcl-xL基因沉默诱导人乳腺癌细胞凋亡的研究被引量：1: 2005年; 目的　研究 si RNA(sm all interfering RNA)对 MCF- 7细胞株 Bcl- x L 基因表达的抑制作用及对癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法　体外转录法合成特异针对人 Bcl- x L 基因的 si RNA;荧光标记法标记 Bcl- x Lsi RNA;脂质体法将 si RNA转入 MCF- 7细胞株 ;流式细胞术检测 si RNA的转染效率 ;半定量 RT- PCR法检测si RNA对 Bcl- x L 基因表达的抑制作用 ;MTT法检测 si RNA对细胞生长增殖抑制作用 ;荧光染色法观察 si RNA诱导细胞凋亡的作用。结果　 si RNA的转染效率在一定剂量范围内随浓度的增加而增加 ,si RNA转染组 Bcl- x Lm RNA表达水平可下调约 72 % ,在对照组内 m RNA表达水平无明显改变。细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖性和时间依赖性。荧光显微镜下观察肿瘤细胞发现 ,si RNA5 0、10 0、2 0 0 nm ol/L 转染组出现典型的凋亡形态学变化。结论　脂质体法对 si RNA的瞬时转染效率较高 ,体外转录合成的 si RNA能特异有效下调 Bcl- x L 基因的表达 ,瞬时转染 Bcl- x L si RNA能有效抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。低剂量 Bcl- x L si; 李继霞周克元蔡康荣梁统张月飞; 关键词：基因疗法脱噬作用

bcl-xL短发夹状RNA重组真核表达质粒对几种细胞增殖的影响被引量：1: 2006年; 目的:以自行构建的真核表达质粒pmU6为基础,针对bcl-xL基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒载体,并观察它们对CNE-2Z、MCF-7和ECV-304细胞株增殖的影响。方法:将两条合成的bcl-xL寡核苷酸链插入pmU6载体中产生pmU6-RNAi重组质粒,把重组质粒转染到细胞中,MTT比色法检测细胞的生长抑制率。结果:bcl-xLshRNA对CNE-2Z细胞株的生长增殖有明显的抑制作用,而对MCF-7和ECV-304细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结论:提示pmU6-RNAi重组体能在细胞内表达短发夹状RNA,产生了RNA干扰效应并抑制靶细胞的生长增殖。; 刘芳何承伟张月飞周克元; 关键词：RNA干涉基因转染

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广东省自然科学基金(31962)

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