广东省自然科学基金(05200176)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 相关作者：吴长有李丽池沛冬范艳莹杨静更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BrdU掺入与T细胞的活化和细胞因子表达的关系被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨利用流式细胞术(FCM)检测细胞增殖(BrdU掺入)与T细胞的活化及细胞因子表达的关系。方法:正常人PBMC经PMA+Ionomycin刺激不同时间,在培养结束前1 h加入BrdU,利用抗BrdU以及多种抗细胞表面和抗细胞因子抗体标记,FCM检测。结果:体外刺激PBMC 48 h后,可见T细胞有BrdU掺入,但随着时间的延长,掺入率没有明显增加。对比分析BrdU掺入与活化分子表达的关系表明,CD69在刺激后8 h达高峰,而CD25则需要24 h后达到高峰。另外,BrdU掺入与细胞因子表达没有明显关系,当PBMC刺激后8 h,即有大量IFN-γ的表达,而当培养时间延长到24、48和72 h后,IFN-γ的表达没有明显改变。OKT3+antiCD28刺激T细胞后BrdU的阳性率高于PMA+Ionomycin刺激的T细胞,CD8+T细胞掺入率高于CD4+T细胞。结论:利用FCM检测BrdU+细胞可以用于评价T细胞的增殖反应,但在多克隆刺激的条件下,只有少数细胞发生增殖,并且BrdU掺入率受刺激剂种类和时间的影响,BrdU掺入与活化分子和细胞因子的表达均没有明显关系。
- 李丽池沛冬孟锐杨滨燕吴长有
- 关键词：BRDU增殖流式细胞仪细胞活化
- CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4^+ T细胞相关性的探讨被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨CD154+细胞的表型特征与初始和记忆CD4+ T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3+抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4+ T细胞,而不表达于CD8+T细胞。对比分析CD4+CD154+ T和CD4+CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4+CD154+ T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3+抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4+ T细胞均为CD4+CD154+ T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4+CD154+ T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4+ T细胞。
- 李丽吴长有
- 关键词：CD4^+T细胞CD154记忆T细胞
- 未甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸对小鼠脾细胞产生免疫球蛋白E的抑制作用被引量：4
- 2007年
- 【目的】探讨未甲基化CpG的寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在体外对小鼠脾细胞和纯化B细胞产生免疫球蛋白E(IgE)的作用及其机制。【方法】在体外,小鼠脾淋巴细胞和纯化B细胞与白细胞介素4(IL-4)+抗CD40单克隆抗体(anti-CD40)在CpG ODN存在或不存在的条件下刺激3d或7d后,用酶联免疫吸附试验法检测IgE的水平,用流式细胞仪检测CD19阳性B细胞的分裂及活化情况。【结果】CpG ODN呈剂量及时间依赖性地抑制由IL-4+anti-CD40诱导的小鼠脾细胞IgE的产生,anti-IFN-γmAb及anti-IL-12mAb不能完全拮抗CpG ODN对IgE产生的抑制作用。同样地,CpG ODN抑制小鼠纯化B细胞IgE的产生。进一步分析结果表明,CpG ODN促进B细胞活化及共刺激分子CD80的表达,但抑制B细胞分裂。【结论】CpGODN直接作用于B细胞而发挥对IgE的抑制作用,该研究为基础和临床研究提供科学理论依据。
- 谢海瑞沈二霞李文益吴长有
- 关键词：CPGODN脾细胞小鼠
- IL-12恢复并促进氟尿嘧啶抑制的T细胞免疫功能被引量：7
- 2007年
- 背景与目的:目前,氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)仍然是临床上广泛应用的肿瘤化疗药物之一。白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)的生物学功能是促进Th1细胞分化以及诱导CD8+T细胞γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的产生。本研究进一步探讨5-FU对正常人外周血T细胞介导免疫应答的抑制机制,以及IL-12是否能够恢复由5-FU引起的免疫抑制功能。方法:观察5-FU对正常人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及肝癌细胞株HepG2增殖和活性的影响。另外,PBMCs在anti-CD3或anti-CD3+anti-CD28刺激的条件下,加入不同浓度5-FU(0.20～50.00μg/ml)共同培养,ELISA法检测培养上清中IFN-γ的水平。PBMCs预先加入或不加入5-FU共同培养后,再分别加入anti-CD3+anti-CD28刺激,利用流式细胞术分析T细胞亚群表达细胞因子IFN-γ和IL-2以及细胞活化分子CD25表达的变化。Anti-CD3+anti-CD28、IL-12、5-FU不同配伍组合与PBMCs共培养后收集上清液,ELISA法检测IFN-γ水平,然后利用流式细胞术检测T细胞亚群IFN-γ表达的变化。结果:5-FU抑制PBMCs和HepG2细胞的增殖,同时以浓度依赖方式抑制正常人PBMCsIFN-γ的产生(P=0.024)。T细胞亚群分析的结果表明,加入5-FU组与未加入5-FU组相比,表达IFN-γ的CD4+T细胞百分率从2.1%下降到0.7%,CD8+T细胞百分率从3.9%下降到2.2%;表达IL-2的CD4+T细胞百分率从2.5%下降到0.7%,CD8+T细胞百分率从0.4%下降到0.2%;同时这两种细胞亚群CD25的阳性率和平均荧光密度都明显降低。anti-CD3+anti-CD28组,加入IL-12前表达IFN-γ的CD4+和CD8+T细胞百分率分别为1.1%和3.2%,加入IL-12后分别为1.6%和4.1%;anti-CD3+anti-CD28+5-FU组,加入IL-12前表达IFN-γ的CD4+和CD8+T细胞百分率分别为0.5%和1.1%,加入IL-12后分别为1.0%和2.5%。结论:5-FU抑制肿瘤细胞增殖的同时也抑制正常人的免疫功能,IL-12能够恢复并促进由5-FU抑制的T细胞免疫功能。
- 池沛冬李丽范艳莹吴长有
- 关键词：氟尿嘧啶T淋巴细胞Γ干扰素白细胞介素12
- 抗原特异性Th17细胞的分化与调节被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨影响抗原特异性Th17细胞分化和调节的因素。方法:T细胞受体转基因小鼠(DO11.10)CD4+T细胞,与同背景正常小鼠的脾细胞混合,经OVA多肽刺激后,在不同的Th17极化的培养条件下,观察Th17细胞及细胞因子的产生。结果:单纯OVA抗原刺激主要诱导特异性Th1型反应,在TGF-β和IL-6存在的条件下,主要诱导Th17反应;当加入IL-23之后,促进了Th17细胞的分化。阻断了IFN-γ和IL-4之后,Th17细胞的百分率明显增加。LPS可以促进Th1型细胞因子的产生,但对抗原特异性Th17细胞的分化没有明显的促进作用。结论:抗原特异性Th17细胞是与Th1、Th2相对独立的细胞亚群,TGF-β、IL-6和IL-23可诱导或促进Th17的分化,而Th1和Th2细胞因子抑制其分化。
- 杨静贾磊李丽吴长有
- 关键词：TH17T细胞亚群流式细胞术细胞因子
- 环孢素A对小鼠Th17细胞分化的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:观察在抗CD3单克隆抗体(mAb)+rIL-23刺激的条件下,环孢素A(CsA)对Th17细胞分化的影响。方法:小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3 mAb、抗CD3 mAb+rIL-23及抗CD3 mAb+rIL-23+不同浓度的CsA刺激后,用ELISA检测IL-17和IFN-γ的水平,并用流式细胞仪在单个细胞水平上检测产生IL-17的T细胞亚群。结果:单独抗CD3 mAb能诱导少量的IL-17产生,加入IL-23后呈剂量依赖的方式明显增加IL-17的产生。CsA对抗CD3 mAb+rIL-23诱导的Th17细胞分化呈剂量依赖性的抑制作用。CsA不仅抑制早期Th17的分化,当细胞激活48小时后,CsA对Th17细胞的分化仍有抑制作用。CsA除了抑制Th17细胞分化外,对IFN-γ和IL-2的产生也有抑制作用。此外,T细胞亚群分析的结果表明IL-17主要由CD4+T细胞产生,而CD8+T细胞几乎不产生IL-17。结论:CsA可以抑制Th17细胞的分化,进一步阐明了CsA免疫抑制及抗炎作用的机制,为临床上应用CsA提供科学理论和实验依据。
- 王俨吴长有
- 关键词：环胞素ATH17IFN-Γ
