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实验性2型糖尿病恒河猴模型的构建及其部分临床特征分析被引量：6: 2013年; 目的构建2型糖尿病(T2DM)恒河猴模型,使之成为研究人类T2DM的有效替身。方法以高糖高脂饮食为基础,在出现高脂血症和肥胖状态后注射35 mg/kg的链脲佐菌素(STZ),测定体重指数、血脂、空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数、尿糖和口服葡萄糖耐量试验等,分析其部分临床特征。结果 T2DM模型组体重指数(BMI)大于35达到重度肥胖,有高脂血症的特点,空腹血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数显著增高(P<0.01),尿糖检测呈阳性,葡萄糖耐量受损并且空腹血糖高于7 mmol/L、2 h的血糖水平高于11.1 mmol/L,胰岛有轻度损伤和病变。结论通过部分临床特征分析,T2DM模型组具有典型的T2DM临床特征,可成为T2DM研究的有效模型。; 鲁帅尧和占龙杨凤梅禹文海赵远李艳艳王俊斌陈丽雄乞素冬; 关键词：胰岛素抵抗恒河猴

携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定: 2013年; 目的包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力。方法对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度。然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达。结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109VG/mL;重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21mRNA表达,免疫荧光测到Vero细胞中有hFGF21蛋白表达。结论成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达。; 鲁帅尧严敏王晓囡和占龙周艳赵远禹文海李鸿钧; 关键词：细胞

PDX-1腺病毒载体构建及其在脂肪间充质干细胞中的表达被引量：2: 2014年; 研究通过重组腺病毒表达系统包装重组腺病毒Ad-PDX-1,通过重组腺病毒将Pancreatic duodenal homeobox1(PDX-1)导入大鼠脂肪间充质干细胞(rat adipose mesenchymal stem cells,rASCs)中,评价PDX-1在rASCs中的表达情况,为进一步探讨ASCs-PDX-1在体内修复糖尿病的潜能提供了实验基础。研究通过构建pAdEasy-CMV-PDX-1腺病毒质粒,在重组腺病毒表达系统PadEasy-1中成功包装出重组腺病毒Ad-PDX-1。培养及鉴定大鼠脂肪间充质干细胞,将携带PDX-1的重组腺病毒感染rASCs,通过RT-PCR、免疫荧光及免疫印迹(Western blotting)检测PDX-1在rASCs中的表达及产物定位。结果显示,构建的重组腺病毒包装成功,具有较高滴度,并能成功感染大鼠脂肪间充质干细胞。PDX-1蛋白定位于细胞核,并可稳定表达,为后续将大鼠脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞诱导分化奠定了基础,为糖尿病的干细胞治疗提供依据。; 王晓囡周艳严敏严敏李松鲁帅尧李鸿钧; 关键词：脂肪间充质干细胞腺病毒载体

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协和青年科研基金(2012D14)