国家自然科学基金(3086033)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：董坚周华华熊秋霞刘为青耿计伟更多>>
- 相关机构：昆明医学院第一附属医院昆明医科大学昆明医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省科技条件平台建设计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应被引量：2
- 2011年
- 目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。
- 耿计伟董坚刘为青高嫦娥熊秋霞缪延栋周华华李秋恬李臣
- 关键词：MDA-MB-231细胞靶向性
- 活性氧在骨质疏松症发生中作用及信号通路研究进展被引量：1
- 2010年
- 随着老龄人口的增多,骨质疏松症的发病率也在逐年增加。研究表明,骨质疏松症与很多因素有关,提出了很多假说,其中氧化应激学说引起众多学者的重视,活性氧与骨质疏松症的发生有着密切联系,本文就活性氧介导的骨质疏松症的作用及信号通路机制研究结果进行探讨。
- 陈学秋孙俊陆地
- 关键词：活性氧骨质疏松症信号转导通路
- 细胞穿膜肽的研究进展与前景展望被引量：6
- 2012年
- 细胞穿膜肽(CPPs)是具有细胞膜穿透能力的小分子多肽,能携带大分子生物活性物质进入哺乳动物细胞,既不影响转导物质的生物活性且不会损伤细胞,其具体穿膜机制尚在研究,但并不影响其在生命科学研究领域中的应用。在穿膜肽研究的基础上,人们发现了包括肿瘤归巢肽,线粒体穿透肽,可活化细胞穿膜肽,嵌合肽,抗微生物肽等具有高效穿膜活性多肽片段,其作用更加广泛,他们给药物载体研究带来了机遇。然而,由于CPPs作为药物载体的应用过于复杂和难于控制,存在靶细胞摄取效率低及体内吸收、分布、生物利用度和毒性等方面问题,给其进一步研究和应用带来挑战。
- 周华华董坚
- 关键词：穿膜肽
- 乳腺癌特异性多肽介导生物大分子体内外效应
- 2012年
- 探讨乳腺癌特异性多肽PI携带外源性生物大分子靶向抗肿瘤的作用.将分离纯化获得的融合蛋白PI-EGFP与靶细胞MDA-MB-231体外共培养,探讨融合蛋白与靶细胞的结合能力;将此融合蛋白经尾静脉及肿瘤局部注射入荷瘤裸鼠体内,探讨其在肿瘤部位的聚集程度;利用分子克隆技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk,诱导表达、分离纯化、鉴定获得的融合蛋白PI-HSV-TK,将不同浓度的融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,经更昔洛韦(ganciclovir,GCV)作用后,探讨PI-HSV-tk对细胞的靶向杀伤效应.荧光显微镜下观察,在靶细胞内可检测到绿色荧光信号,经尾静脉及局部注射融合蛋白PI-EGFP后,在不同组织器官可见不同强度的荧光信号,在尾静脉注射组的肾脏和肿瘤部位可检测到荧光信号,而局部注射组仅在肿瘤部位可检测到;成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk;分离纯化获得高效表达的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定融合蛋白的表达正确;CCK-8法及流式细胞仪检测显示,GCV对转导融合蛋白的MDA-MB-231细胞有杀伤作用,IC50值为152.64μg/mL.乳腺癌特异性转导多肽能携带生物大分子进入靶细胞,并携带具有杀伤效应的物质,使其发挥靶向治疗作用,为进一步探讨该多肽作为靶向性载体奠定实验基础和理论依据.
- 耿计伟高嫦娥刘为青熊秋霞缪延栋周华华董坚
- 关键词：靶向治疗
