国家自然科学基金(39670809)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 相关作者：邹伟崔肇春李亚丽李兆育夏泉更多>>
- 相关机构：大连医科大学辽宁师范大学大连大学更多>>
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- 磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达抑制磷脂酶Cγ1磷酸化及转位被引量：2
- 2006年
- 目的探讨转染磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2(PEMT2)基因抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的机制。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot方法,观察转染PEMT2基因对大鼠肝癌CBRH 7919细胞磷脂酶C γ 1(PLC γ 1)磷酸化及在细胞内转位的影响;同时观察转染PEMT2基因对肝细胞生长因子受体(c- Met)自身磷酸化活化的影响。结果转染PEMT2后,质膜结合的PLC γ下降,为对照组的45％。膜结合的磷酸化PLC γ 1约为对照组细胞的27％,同时c-Met磷酸化程度显著下降,约为对照组细胞的32％。结论转染PEMT2基因可抑制细胞PLC γ 1磷酸化及由胞浆向质膜转位,抑制c-Met自身磷酸化活化,从而下调CBRH-7919细胞c-Met／PLC γ 1信号转导途经。
- 李亚丽邵彦华刘之力夏泉马克里
- PEMT2过表达抑制大鼠肝癌细胞PI3K,Akt的表达被引量：2
- 2004年
- 为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (PEMT2 )过表达抑制大鼠肝癌细胞增殖的机制 ,构建了PEMT2高表达细胞克隆 ,并采用半定量RT PCR、免疫细胞化学及流式细胞仪技术 ,研究了PEMT2过表达对PI3K/Akt信号转导途径的影响 .实验结果显示 ,PEMT2过表达可抑制细胞PI3K和Akt的表达 ,并诱导细胞凋亡 .这一结果提示 ,PI3K/Akt信号转导途径下调可能是PEMT2抑制肝癌细胞增殖的部分机制 .
- 李亚丽邹伟马克里夏泉崔肇春
- 关键词：磷脂酰肌醇-3-激酶肝癌细胞AKT蛋白激酶B
- 磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达对大鼠肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C表达及转位的影响被引量：2
- 2005年
- 目的探讨转染磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2(PEMT2)基因抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的机制。方法采用免疫细胞化学和蛋白质印迹法观察pemt2过表达对肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C(PKC)表达及在细胞内转位的影响,同时采用高效薄板层析技术对细胞内二脂酰甘油(DAG)的水平进行检测。结果转染PEMT2使细胞CPKC α表达降低,CPKC β2表达增加,并由胞浆向质膜转位。同时细胞内DAG水平下降。转染PEMT2对其它PKC亚型的表达及细胞内转位无显著影响。结论转染PEMT2 对不同亚型PKC表达及细胞内转位的影响可能与其抑制细胞增殖,诱导凋亡的机制有关。
- 李亚丽马克里邹伟夏泉崔肇春
- 关键词：蛋白激酶C肝癌细胞大鼠肝癌过表达转位
- pLNCX-pemt2重组载体的构建及pemt2基因在大鼠肝癌CBRH-7919细胞中的表达被引量：6
- 2000年
- 为进一步研究 pemt2对肝癌细胞生长抑制的作用机制提供方便的实验模型 ,构建了p LNCX- pemt2重组体 .将目的基因 pemt2连接入含有 neo抗性基因的真核细胞表达载体 p LNCX中 ,构建 p LNCX- pemt2重组子 ,并用磷酸钙沉淀法将其转入大鼠肝癌 CBRH- 791 9细胞中 ,应用PCR、Western印迹及 [3 H]SAM参入等技术对其转染、表达及活性进行鉴定 .转染 p LNCX- pemt2的大鼠肝癌细胞 ,PEMT2成功表达 (分子量为 2 2 .5k D) ;高表达克隆 PEMT2的表达量比对照组高约 5倍 ,其活性比对照组高 2 .1倍 ;细胞生长的倍增时间从 2 1 .54± 7.0 8h延长到 43.2 2± 7.1 1h.结果表明 ,p LNCX- pemt2重组体转入肝癌细胞后 ,PEMT2蛋白得到高效表达 ,明显抑制肝癌细胞生长 .
- 邹伟李春蕾李兆育李亚丽马克里夏泉崔肇春
- 关键词：基因表达肝癌
- Ras-GTP-Raf复合物及其信号传导的分子机制被引量：3
- 2000年
- Ras GTP Raf复合物是RTKs介导的Ras通路的一个关键环节 ,在Ras GTP Raf复合物中信号传递的分子机制是Ras GTP Raf复合物作为一个整体开关信号传导、启动信号放大级联反应及可能导致肿瘤发生 .此外 ,PKC介导的Raf的激活也必需有Ras GTP Raf复合物的存在 .
- 李兆育邹伟崔肇春
- 关键词：信号传导肿瘤
- 磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2的表达抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞的增殖被引量：5
- 2000年
- 利用磷酸钙沉淀法将重组的质粒 p CMV5 -pemt2与 p SV-neo共转染 ,经 G418筛选 ,免疫细胞化学和免疫印迹法检测蛋白表达 ,[3 H] -SAM掺入测定酶的活性 ,获得稳定表达 PEMT2的阳性克隆 .经台盼蓝排阻法测生长曲线 ,流式细胞仪测定细胞周期 ,MTT 法检测细胞生长抑制率 .观察了磷脂酰乙醇胺 N-甲基转移酶 2( phosphatidylethanolam ine N -m ethyltransferase 2 ,PEMT2 )的表达对大鼠甲胎蛋白阳性 ( AFP+ )肝癌细胞系 CBRH-7919增殖的影响 .结果表明 :PEMT2在 CBRH-7919肝癌细胞中已成功表达 ,细胞的增殖能力下降 ,S期明显减少 ,AFP含量减少 .说明 PEMT2的表达可明显抑制大鼠 CBRH -7919肝癌细胞的生长 .
- 邹伟李兆育李亚丽崔肇春
- 关键词：抑癌基因肝癌细胞增殖
- pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡被引量：8
- 2001年
- 为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术研究c Met(HGF的受体 )及抗凋亡蛋白Bcl 2在此过程中的表达和是否诱发凋亡 .免疫组织化学及Western印迹分析显示在转染高表达细胞中 ,c Met及Bcl 2的表达下调 .流式细胞仪分析表明 ,在转染pemt2 cDNA的高表达细胞中 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 ,并在G0 期出现一个凋亡峰 .琼脂糖凝胶电泳谱显示梯状条带 .结果表明 :pemt2的转染可使大鼠肝癌细胞的c Met及Bcl 2的表达下调 ,并发生凋亡 .
- 邹伟李兆育李亚丽马克里夏泉崔肇春
- 关键词：磷脂酰胆碱肝癌细胞凋亡C-MET转染
- 蛋白激酶B及其在磷脂酰肌醇3-激酶介导的信号转导中的作用被引量：17
- 2000年
- 蛋白激酶B(PKB)是原癌基因c akt的表达产物 ,它参与由生长因子激活的经磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI3K)介导的信号转导过程。与许多蛋白激酶相似 ,PKB分子具有一特殊的AH/PH结构域 (AH/PHdomain) ,后者能介导信号分子间的相互作用。PKB是PI3K直接的靶蛋白。PI3K产生的脂类第二信使PI 3,4, P2 和PI 3,4,5 P3等均能与PKB和磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 (PDK)的AH/PH结构域结合 ,使二者转位于质膜上并活化。PDK也能使PKB磷酸化而激活 ,激活的PKB又进一步激活抗细胞凋亡机制、葡萄糖代谢 (糖原合成、糖酵解及葡萄糖的摄取 )及蛋白质合成等过程 。
- 邹伟李兆育李春蕾崔肇春
- 关键词：蛋白激酶B磷脂酰肌醇3-激酶信号转导
- PEMT2过表达增强大鼠肝癌细胞cAMP的表达
- 2009年
- 目的:在大鼠肝癌细胞株CBRH-7919中研究磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2(PEMT2)过表达对cAMP表达量的影响。方法:利用基因转染技术建立PEMT2过表达的大鼠肝癌细胞株,用免疫细胞化学法观察cAMP的表达情况,用[3H]-cAMP掺入法测定cAMP的含量,用流式细胞术分析细胞周期的变化,并与原代培养大鼠肝细胞比较。结果:cAMP在原代培养的肝细胞中表达较高,在肝癌细胞中含量均较低,PEMT2高表达可明显提高肝癌细胞内cAMP的含量。结论:PEMT2表达抑制肝癌细胞的生长可能与cAMP介导的信号转导通路加强有关。
- 王震春崔玉影邹伟
- 关键词：肝癌CAMP信号转导
- pemt2-cDNA转染抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞周期相关蛋白的表达被引量：1
- 2006年
- 目的探讨磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2(PEMT2)的转染抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法将带有完整pemt2-cDNA质粒转染人大鼠肝癌CBRH-7919细胞,筛选出稳定传代并高表达PEMT2的细胞株,用Western blot, 比较了细胞周期调控因子细胞周期蛋白D1／细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白E／CDK2、phospho-Rb、 caspase3、c-jun以及小窝蛋白caveolin的表达变化。结果在PEMT2高表达细胞中CDK2、CDK4、phospho-Rb和c jun表达下调,caspase3表达上调。结论 PEMT2的高表达降低CDK2和CDK4的表达水平,同时下调原癌基因phospho- Rb和c-jun的表达,抑制肝癌细胞由G1期进入S期,从而抑制肝癌细胞增殖并诱发肝癌细胞的凋亡。
- 刘翠平邹伟王亮崔肇春
- 关键词：细胞周期蛋白D1细胞凋亡
