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人细胞色素P450前mRNA的可变剪接研究进展被引量：2: 2005年; Human genes typically contain multiple intron s, and in many cases the exons can be joined more than one way to generate multi ple mRNAs, encoding distinct protein isoforms. This process is called alternativ e splicing. The article summarized the human cytochrome P450 pre mRNA alternati v e splicing and their regulatory mechanism and impacts on biological functions.; 诸葛坚余应年; 关键词：细胞色素P450 可变剪接

一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆被引量：2: 2000年; 目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6cDNA序列相比 ,在编码区有两个变异 ,即codon 8CTG→TTG ,编码的氨基酸不变 ,为亮氨酸。codon479GGC(甘氨酸 )→GTC(缬氨酸 ) ,其余均相同。而在其 3′端非编码区变异很多。与Fernandez -Salguero等报道的CYP2A7序列相比 ,其 5′端虽与所克隆的CYP2A6有较多差异 ,但其codon479也是GTC(缬氨酸 ) ,在 3′端非编码区仅略有差异。而所克隆的CYP2A6cDNA与Yamano等报道的CYP2A7序列相比 ,3′端非编码区至所设PCR引物止 ,所克隆的基因序列完全相同 ,而在编码区却差异较多。结论 :本实验室克隆的CYP2A6cDNA是一种新的CYP2A6cDNA序列。; 诸葛坚钱羽力谢海洋余应年; 关键词：细胞色素P450

一个新的人细胞色素P450 2B6 cDNA 序列被引量：1: 2000年; 诸葛坚钱羽力谢海洋余应年; 关键词：细胞色素P450 CDNA序列

转基因细胞系CHL-3A4可使硝苯吡啶的多药耐药逆转作用丧失被引量：2: 2000年; 目的：检测本实验室构建的表达人细胞色素Ｐ４５０３Ａ４同功酶转基因细胞系ＣＨＬ－３Ａ４的硝苯吡啶氧化酶活性。方法：利用多药耐药细胞Ｋ５６２ｒ的阿霉素（ＡＤＲ）耐药性可被硝苯吡啶逆转，而硝苯吡啶又可特异地被ＣＹＰ３Ａ４代谢，观察硝苯吡啶在ＣＨＬ－３Ａ４Ｓ９混合物（Ｓ９ｍｉｘ）中孵育前后的生物学活性变化来判断ＣＨＬ－３Ａ４细胞的ＣＹＰ３Ａ４硝苯吡啶氧化酶活性。结果：Ｋ５６２ｒ细胞在含有硝苯吡啶（ＮＩＦ）（１２．５μｇ·Ｌ－１）的培养基中培养时，对阿霉素的ＩＣ５０值从不含ＮＩＦ时的（６．４７± ０．６０）ｍｇ· Ｌ－１降至（０．８９±０．１５）ｍｇ· Ｌ－１（Ｐ＜０．０１）。Ｋ５６２ｒ细胞在含有分别经ＣＨＬ－３Ａ４、ＣＨＬ细胞的Ｓ９组分和灭活的ＣＨＬ－３Ａ４细胞的Ｓ９组分预处理的ＮＩＦ（１２．５μｇ·Ｌ－１）的培养基中培养时，阿霉素对其的ＩＣ５０值分别为（６．１０±０．５０）ｍｇ· Ｌ－１、（０．３２±０．０９）ｍｇ·Ｌ－１和（０．３２±０．０４）ｍｇ·Ｌ－１。前者和后两者相比Ｐ＜０．０１。结论：实验室构建的表达人细胞色素Ｐ４５０３Ａ４同功酶转基因细胞系ＣＨＬ－３Ａ４具有硝苯吡啶氧化酶活性，从而进一步确证?; 钱羽力诸葛坚余应年; 关键词：细胞色素P450 硝苯吡啶多药耐药

稳定表达人细胞色素P4501A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应: 2003年; 目的 :建立稳定表达人细胞的色素 P4 5 0 1A2 (CYP1A2 )的 Hep G2细胞。方法 :将所克隆的野生型CYP1A2 c DNA从重组质粒 p GEM- CYP1A2中用 Kpn / Bam H 双酶切 ,并亚克隆到哺乳动物细胞表达载体p REP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌 Top10 ,用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒 p REP9- CYP1A2转染肝癌细胞 Hep G2 ,用 RT- PCR技术对转基因细胞的 CYP1A2m RNA表达作了分析 ,并用 MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素 B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果 :与 Hep G2细胞相比 ,Hep G2 - CYP1A2转基因细胞表达 CYP1A2 m RNA,能增强 AFB1的细胞毒作用。结论 :建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系 ,可用于由 CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。; 诸葛坚叶森余应年; 关键词：细胞色素P-450 HEPG2 黄曲霉素B1

人细胞色素P450 1A2 cDNA克隆及鉴定被引量：4: 2000年; 为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相比 ,所克隆的 c DNA,codon51 5AAT→ AAC都编码天冬酰胺 ,而 codon 51 0后面插入了一个CTG(亮氨酸 ) ,则与 Quattrochi等报道的相同 .本实验室克隆的 CYP1 A2 c DNA可能是一种新的CYP1 A2 c DNA,有可能来自于一种新的 CYP1 A2等位基因的转录 .; 诸葛坚钱羽力谢海洋余应年; 关键词：人细胞色素P450 CDNA 克隆

细胞色素P4501A2的转基因细胞及其应用: 2000年; 朱长火昆诸葛坚余应年; 关键词：细胞色素P4501A2 转基因细胞

微核与微核试验在遗传毒理学中的应用被引量：54: 2000年; 王爽诸葛坚余应年; 关键词：微核微核试验遗传毒理学

人细胞色素P4502A6cDNA克隆及其在哺乳类细胞中的表达被引量：8: 2000年; 应用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术和DNA重组技术从人肝组织中克隆细胞色素 P4502 A6( CYP2 A6) c DNA片段至克隆载体 p Blue-script SK( M1 3- )中 ,经限制性酶切图谱分析确证克隆的片段为 CYP2 A6c DNA,然后将该片段亚克隆入真核细胞表达载体 p REP9,用改良磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠肺 CHL细胞系 ,建立 CHL- 2 A6转基因细胞系 ,并对 CYP 2 A6特征表达酶香豆素 - 7-羟化酶 ( COH)活性进行了测定 ,结果显示 CHL-2 A6S9组分的 COH比活性是 ( 2 .58± 0 .68) nmol· min-1· g-1蛋白 ,而对照细胞 CHL测不到 COH活性 ,表明所转 CYP2 A6c DNA表达的蛋白质具有功能 .CHL - 2 A6的建立为药物代谢研究和毒理学研究提供了强有力的工具 .; 严乐勤余应年诸葛坚谢海洋; 关键词：细胞色素P450 CDNA

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国家自然科学基金(39670801)

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