河北省医学科学研究重点课题(20100416)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：苏景伟祝淑钗刘志坤沈文斌李娟更多>>
- 相关机构：河北医科大学第四医院河北医科大学更多>>
- 发文基金：河北省医学科学研究重点课题国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰MDC1基因对食管癌细胞X线照后细胞周期及相关蛋白表达影响被引量：9
- 2015年
- 目的：利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109中MDC1基因表达，观察照射后细胞周期和放射敏感性变化并探讨相关机制。方法针对MDC1mRNA序列设计合成3对有效干扰序列和阴性对照序列，与载体pSIH1？H1？copGFP形成重组质粒，RT？PCR和蛋白印迹法测定MDC1mRNA和蛋白水平表达。克隆形成实验检测细胞放射敏感性，流式细胞术检测细胞周期，蛋白印迹法检测CHK1、CHK2蛋白表达，激光共聚焦显微镜观察细胞核内MDC1斑点数量。单因素方差分析组间差别。结果成功构建 pMDC1？shRNA 质粒并感染 ECA109细胞，获得稳定转染细胞 ECA109M。ECA109M细胞MDC1mRNA、蛋白表达水平低于ECA109N、ECA109细胞（ P＝0．032、P＝0．041）。5 Gy照射后 ECA109M 细胞 G2＋M 期比例低于 ECA109N、ECA109（P＝0．026）。5 Gy 照射后 ECA109、ECA109N、ECA109M细胞中CHK1和CHK2蛋白表达相近（P＝0．345和P＝0．451），ECA109M 细胞CHK2T68蛋白表达低于ECA109、ECA109N细胞（ P＝0．012）。 ECA109细胞D0值为3．06 Gy，SF2值为0．91；ECA109N、ECA109M细胞的D0值分别为2．90、1．88 Gy；SF2值分别为0．89、0．84（ P＝0．021；P＝0．037）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可以降低细胞周期相关蛋白的表达，解除细胞周期阻滞，增强食管癌细胞ECA109的放射敏感性。
- 刘志坤祝淑钗苏景伟李娟沈文斌
- 关键词：食管癌细胞RNA干扰细胞周期相关蛋白MDC1
- 慢病毒介导沉默食管癌细胞53BP1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的研究
- 2016年
- 背景与目的:p53结合蛋白1(p53 binding protein,53BP1)在多种正常组织和肿瘤细胞中有表达,与放射线照射后细胞周期阻滞有关。体外实验证实抑制53BP1的蛋白表达可有效地消除肿瘤细胞照射后引起的周期阻滞,增加放射敏感性。但体内实验国内尚未见相关报道。该研究旨在探讨沉默食管癌细胞53BP1基因对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法:将48只BALB/c/nu裸鼠按随机数字表法分为对照组、单纯照射组、空载体组、空载体加照射组、沉默53BP1组以及沉默53BP1加照射组,每组8只,于裸鼠皮下接种相应食管癌细胞ECA109,制备裸鼠模型,给予15 Gy放射线单次照射,受照后1 h每组处死3只裸鼠,将肿瘤标本按蛋白[质]印迹法(Western blot)及流式细胞分析要求处理,Western blot检测移植瘤组织中CHK1、CHK2和磷酸化CHK2-T68的表达,流式细胞术分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡。观察各组剩余裸鼠移植瘤照射后的生长情况,移植瘤体积变化情况。结果:所有接种裸鼠均成活并有肿瘤形成,各组之间肿瘤体积大小差异无统计学意义(F=0.67,P=0.69);单纯照射组和空载体照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组(P=0.02),沉默53BP1加照射组裸鼠的肿瘤生长速度最慢(P=0.03),沉默53BP1加照射组的相对生长速率较空载体加照射组和单纯照射组降低,生长抑制率增加(P=0.01)。沉默53BP1加照射组的q值为1.45;沉默53BP1加照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达产物未见明显变化(P=0.71),CHK2-T68的磷酸化水平较单纯照射组和空载体照射组明显下降(P=0.03),各组裸鼠的瘤组织中细胞周期分布和凋亡率差异无统计学意义(P=0.45)。结论:体内研究显示沉默53BP1基因可以提高食管癌放射敏感性。
- 刘志坤张魏丽祝淑钗苏景伟李娟沈文斌
- 关键词：食管癌移植瘤RNA干扰
- 慢病毒介导的RNAi沉默食管癌Eca109细胞MDC1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响被引量：1
- 2016年
- 目的 研究抑制MDC1基因的蛋白表达对裸鼠移植瘤的影响,观察裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化。方法 根据MDC1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列和阴性对照序列,并与载体pSIH1-H1-copGFP形成重组质粒,RT-PCR和蛋白印迹法测定MDC1 mRNA和蛋白表达水平,筛选出阴性转染组（ECA109-N）、MDC1转染组（ECA109-M）细胞,将其接种裸鼠分为ECA109-M、ECA109-N、ECA109组,上述各组又分为^60Coγ射线照射组和未照射组。观察各组裸鼠移植瘤照射后体积变化,蛋白印迹法检测移植瘤组织中CHK1、CHK2、CHK2T68表达水平,流式细胞仪分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡情况。多组样本均数间的比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果 成功构建pMDC1-shRNA质粒并转染ECA109细胞,获得稳定转染细胞ECA109-M。所有接种裸鼠均成活并在接种后1周左右可见裸鼠爪下形成移植瘤,各组之间肿瘤大小相近（P〉0.05）。15 Gy照射后单纯照射组和空载照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组（P〈0.05）,其中MDC1转染联合照射组较阴性对照组和空白组肿瘤相对生长速率降低（P〈0.05）,生长抑制率升高（P〈0.05）。MDC1转染联合照射组q值为1.36。MDC1转染联合照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达水平相近（P〉0.05）,但CHK2T68磷酸化水平明显降低（P〈0.05）,各组裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和凋亡细胞比例也相近（P〉0.05）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可有效增强细胞的放射敏感性,表现为抑制了^60Coγ射线照射后裸鼠移植瘤的生长速度。
- 刘志坤祝淑钗苏景伟李娟沈文斌
- 关键词：裸鼠移植瘤ECA109细胞
- ROC曲线法评价不同指标预测NSCLC放疗后放射性肺炎与食管炎发生的价值被引量：6
- 2011年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)三维适形放射治疗后放射性肺炎与食管炎发生的相关因素,进一步应用ROC曲线评价影响因素预测放射性肺炎与食管炎发生的价值。方法:收集2000年8月至2004年12月符合入组条件接受三维适形放疗的NSCLC患者104例,分析放射性肺炎与食管炎发生的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析评价其临床诊断性能。结果:患者放射性肺炎发生率为62.6%,≥2级放射性肺炎的发生率为38.3%,单因素分析显示肺内病变的PTV、双肺Dmean、V5、V10、V15、V20、V25、V30、V35及V40对放射性肺炎的发生均有显著性影响,Logistic分析显示双肺V35为影响放射性肺炎发生的独立性因素。ROC曲线分析显示双肺V35预测放射性肺炎的最佳界值为20.75%,敏感度为66.10%,特异性为81.00%;放射性食管炎的发生率为46.2%。单因素分析表明NSCLC病变的GTV、CTV、PTV、食管接受的最大剂量和平均剂量、照射野内的食管体积、食管V40、V45、V50、V55、V60、食管LETT45、LETT50、LETT55、LETT60均与放射性食管炎的发生有关,Logistic分析显示病变的GTV、PTV、食管V60是放射性食管炎发生的独立性影响因素,ROC曲线分析显示病变的GTV、PTV、食管V60预测放射性食管炎的最佳界值分别为124.58cm^3(敏感度为68.75%,特异性为57.15%)、325.50cm^3(敏感度为81.25%,特异性为42.86%)及12.5%(敏感度为81.30%,特异性为69.60%)。结论:双肺V/35和病变的GTV/、PTV、食管V60分别是放射性肺炎与食管炎发生的独立影响因素。
- 刘志坤祝淑钗崔彦莉李娟沈文斌苏景伟王玉祥
- 关键词：放射性食管炎ROC曲线
- 慢病毒介导RNF2基因表达对食管癌细胞X线照射后增殖与迁移等影响被引量：5
- 2017年
- 目的 利用RNA干扰技术抑制人食管癌细胞中RNF2基因表达,观察其X线照射对细胞增殖活性、迁移能力、凋亡和细胞周期的影响.方法 培养人食管癌细胞ECA-109,RT-PCR检测RNF2 mRNA水平表达;MTT法检测ECA-109食管癌细胞细胞增殖;蛋白印迹法检测ECA-109-R细胞中RNF2蛋白表达变化;流式细胞技术检测照射后不同时间细胞周期和凋亡变化.Transwell侵袭小室模型检测转染对食管癌细胞迁移能力的影响.重复测量设计资料方差分析.结果 照射组食管癌细胞中RNF2 在mRNA水平和蛋白表达水平均较未照射组明显增加（P〈0.01）,且存在剂量-效应关系;MTT结果显示食管癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低（P〈0.01）;ECA-109-R组细胞中BMI1、RNF2蛋白表达水平较ECA-109组和ECA-109-N组细胞明显降低（P〈0.01）,ECA-109组与ECA-109-N组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;Transwell侵袭小室模型检测结果显示照射后3.5 h ECA-109-R组穿膜细胞数明显低于ECA-109组和ECA-109-N组（P〈0.01）.6 Gy照射后各实验组处于G2＋M期比例明显高于相应未照射组（P〈0.01）,且ECA-109-R组处于G2＋M期的比例均明显低于照射后的ECA-109组和ECA-109-N组（P〈0.05）.照射后ECA-109-R组细胞凋亡率明显高于ECA-109组和ECA-109-N组（P〈0.01）.结论 采用RNA干扰技术降低食管癌细胞中RNF2的表达,降低细胞增殖和迁移能力,解除照射后G2＋M期阻滞,促进细胞凋亡,增加放射敏感性.
- 刘志坤王璇张魏丽杨兴肖苏景伟祝淑钗
- 关键词：细胞增殖细胞周期食管癌细胞系
