国家自然科学基金(81100250)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 相关作者：师建华吕毅贾丽娜王博于良更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 罗格列酮抑制PDGF诱导的胆管成纤维细胞增殖的分子机制
- 2020年
- 目的探讨罗格列酮是否通过活化过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators activated receptor-γ,PPAR-γ),抑制血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)刺激的胆管成纤维细胞增殖,并揭示其发挥作用的分子信号机制。方法以PDGF-AA刺激原代分离并培养的大鼠胆管成纤维细胞增殖,罗格列酮干预并检测PPAR-γ活性。于PDGF-AA刺激细胞前2 h予以LY294002、GW9662抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶-B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase-B,PI3K/AKT)、PPAR-γ信号通路活性。采用Brdu-掺入法检测胆管成纤维细胞增殖;免疫印迹法检测S-期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,skp2)及磷酸化-AKT(p-AKT)的表达;PPAR-γ活性ELISA试剂盒检测PPAR-γ活性。结果PDGF-AA呈剂量依赖性刺激大鼠胆管原代成纤维细胞增殖;罗格列酮显著激活PPAR-γ并抑制PDGF诱导的细胞增殖;采用PPAR-γ抑制剂GW9662预刺激细胞,可逆转罗格列酮对细胞增殖的抑制作用。罗格列酮激活的PPAR-γ通过抑制PDGF刺激的AKT磷酸化、skp2表达而抑制细胞增殖,通过抑制PPAR-γ活性(GW9662刺激细胞)可显著逆转罗格列酮的上述作用。结论罗格列酮通过激活PPAR-γ,抑制PDGF诱导的AKT磷酸化及skp2表达,从而抑制胆管成纤维细胞增殖。
- 师建华吕毅王博贾丽娜于良
- 关键词：PDGFPPAR-ΓPI3K/AKT信号通路细胞增殖
- 二甲双胍抑制大鼠胆管成纤维细胞胶原生成的分子信号机制被引量：2
- 2020年
- 目的探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制。方法取雌雄各半的SD大鼠共50只(体质量150~200 g),CO2窒息法处死后,无菌条件下分离并培养大鼠胆管成纤维细胞,倒置显微镜观察所培养的细胞,发现不同体质量及性别的大鼠所获取的细胞形态及活性无差异。采用随机数字表法进行随机分组,分别设置对照组、TGF-β1组、Smad3 siRNA干预组、结缔组织生长因子(CTGF)siRNA干预组、二甲双胍干预组、Compound C干预组,每组3个样本。设置对照组:大鼠胆管成纤维细胞正常培养;TGF-β1组:10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Smad3 siRNA干预组:Smad3 siRNA转染24 h后+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;CTGF siRNA干预组:CTGF siRNA转染24 h后+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;二甲双胍干预组:10 mmol/L二甲双胍+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Compound C干预组:10μmol/L Compound C+10 mmol/L二甲双胍+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞。以TGF-β1刺激大鼠胆管成纤维细胞分泌胶原,以Smad3 siRNA或CTGF siRNA转染细胞以抑制Smad3或CTGF蛋白的表达,以二甲双胍孵育细胞以激活AMPK,以Compound C预处理细胞以抑制AMPK的活性。采用ELISA或Western-blot的方法检测CTGF、胶原I(Col I)蛋白水平;Western-blot的方法检测p-Smad3/t-Smad3、p-AMPK/t-AMPK、CTGF水平。结果TGF-β1以时间和剂量依赖的方式刺激胆管成纤维细胞胶原I生成,二甲双胍激活的AMPK也剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的胶原I生成;AMPK抑制剂Compound C预孵育细胞,可显著逆转二甲双胍激活的AMPK抑制胶原I生成的作用(P<0.01)。进一步发现,二甲双胍激活的AMPK对TGF-β1刺激的Smad3磷酸化无抑制作用,却可抑制其下游的CTGF蛋白表达(P<0.01)及胶原I生成(P<0.01),而AMPK抑制剂可逆转二甲双胍对CTGF及胶原I的上述作用。结论二甲双胍通过激活AMPK抑制TGF-β1/Smad3信号通路诱导�
- 卢家美张晶晶吕毅王博贾丽娜师建华
- 关键词：转化生长因子-Β1胶原
- 胆道良性狭窄病理变化及发生机制研究进展被引量：2
- 2013年
- 胆道良性狭窄是肝胆外科常见疾病,近年来随着腹腔镜手术的广泛开展,胆管损伤与胆管良性狭窄发病率有增高趋势,处理复杂,复发率较高,深入了解胆管良性狭窄的发生的机制有助于预防和治疗术后胆管良性狭窄。
- 师建华张谞丰于良吕毅
- 关键词：胆道病理变化
