国家高技术研究发展计划(2001AA234041)
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 相关作者：夏云王升启郑素军林汝仙钟森更多>>
- 相关机构：军事医学科学院重庆医科大学附属第二医院重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)RNAi载体的构建及活性评价被引量：10
- 2004年
- RNA干涉是由与特定基因同源互补的双链RNA ,在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解 ,从而导致转录后基因沉默的过程 .为研究内源性的siRNA对靶基因的抑制效果 ,用pPUR/U6载体构建用于细胞内转录靶向hTERT基因的短发夹状siRNA表达质粒 ,并评价其对hTERT基因的抑制效果 .将hTERTcDNA 35 6 5～ 35 83一段 19bp的DNA序列及其反向重复序列 ,用 9bp的连接序列连接后再接上 5个T碱基 ,将此段DNA序列克隆至pPUR/U6载体U6启动子的下游 ,形成能在体内合成hTERT特异性短发夹状RNA的重组质粒载体pPUR/U6 /hTERT .将pPUR/U6 /hTERT与对照质粒pPUR/U6分别转染HepG2细胞 .采用嘌呤霉素筛选和富集转染具有抗性的细胞 .收集存活的细胞接种 12孔板、提取RNA和蛋白质 .以细胞计数法测定细胞的生长速度 ,RT PCR和蛋白质印迹分析hTERT基因的表达 ,端粒重复放大测定法检测端粒酶活性 ,蛋白质印迹检测p5 3蛋白水平 .与转染对照质粒pPUR/U6的细胞相比 ,转染pPUR/U6 /hTERT的细胞其hTERT基因表达水平显著下降 ,端粒酶活性降低 ,细胞生长速度变慢 ,p5 3蛋白表达明显升高 .以上结果表明 ,以DNA质粒为载体产生的内源性短发夹状siRNA能高效抑制hTERT基因的表达 。
- 夏云林汝仙郑素军张敏丽王升启
- KDR为靶的反义寡核苷酸、siRNA活性比较被引量：5
- 2005年
- 目的:观察反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,asONs),细胞内源性表达的短发卡状小干扰RNA(shorthairpinsmallinterferingRNA,siRNA)对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR:Vascularendothelialgrowthfactorreceptor2/kinaseinsertdomain-containingreceptor)表达的抑制作用,探讨阻断DKR蛋白表达对MCF-7细胞增殖、生长的影响,并对两者作了比较。方法:设计了3条反义寡核苷酸,并根据其相应靶KDRmRNA杂交位点,构建了3条以质粒pPUR/U6为载体的可内源性表达短发卡状siRNA的pPUR/U6/KDR-siRNA。分别用Western-blotting方法检测了MCF-7细胞经反义寡核苷酸处理,pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染后对KDR蛋白表达的抑制作用;用MTT法观察了反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖的影响,并观察了pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染细胞的生长曲线。结果:3条反义寡核苷酸于0.8μmol/L时,均有效抑制了细胞KDR蛋白表达,抑制率分别为66.16%,50.21%,58.35%;3条反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖也显示了剂量依赖性下调作用。相应靶位点3条pPUR/U6/KDR-siRNA中,有2条在细胞稳定转染时显著下调了KDR蛋白表达,15天抑制率分别为75.21%,80.08%;30天时为59.29%,60.15%;细胞稳定转染表达siRNA后生长变慢。结论:可根据有效反义寡核苷酸靶位点设计siRNA。
- 郑素军林汝仙夏云黄爱龙钟森王升启任红
- 关键词：反义寡核苷酸SIRNA血管内皮生长因子受体2
- 应用RNA干扰抑制端粒酶逆转录酶表达诱导HepG2细胞凋亡被引量：1
- 2006年
- 人端粒酶由RNA亚单位（hTR）和蛋白组分构成。蛋白组分包括端粒酶逆转录酶催化亚基（hTERT）和端粒酶相关蛋白1（hTEPl）。hTERT表达与端粒酶活性密切相关，是细胞永生化过程中端粒酶活化的限速步骤。抑制hTERT的表达可快速诱导细胞凋亡，其机制不是通过端粒缩短所致。表明hTERT除了其蛋白催化活性外，尚可与其他分子相互作用诱导细胞凋亡。
- 夏云何云燕朱道银林汝仙王升启
- 关键词：凋亡RNA干扰
- 端粒酶逆转录酶小干扰RNA对肝癌细胞的体外抑制作用被引量：13
- 2004年
- 目的 研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞SMMC-7721中抗肿瘤作用。 方法 针对hTERT基因编码区及非编码区,采用T7转录系统在体外合成了2条siRNA,转染SMMC-7721细胞。以四甲基偶氮唑盐试验、逆转录聚合酶链反应及western blot观察其对SMMC-7721细胞增殖、hTERT mRNA及蛋白表达的影响。 结果 2条siRNA以剂量依赖性方式抑制了SMMC-7721细胞增殖,当给药浓度为100nmol/L时,对hTERT mRNA及蛋白表达有明显的抑制作用。 结论 靶向hTERT的siRNA对hTERT基因表达有抑制效果,有可能发展为一种新的抗肿瘤药物。
- 郑素军夏云任红钟森杨英陶鹏王升启
- 关键词：肝癌细胞小干扰RNA人端粒酶逆转录酶SMMC-7721细胞HTERT基因
