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牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中的优化表达被引量：3: 2014年; 为构建牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)基因工程活载体疫苗,根据已知的BVDV Changehun184毒株E2基因序列,利用DN.AStar生物学软件对其进行分析,预测了可能存在的抗原表位,设计6对引物,分别扩增了包含预测抗原位点的6个片段,1—297 aa、1—345 aa、1—374 aa、45—297 aa、45—345 aa和45—374 aa,克隆至穿梭表达载体pMV361中,经酶切、PCR扩增和测序证实已正确插入到表达载体中,构建了6个原核表达质粒。阳性重组质粒通过电转化到卡介苗(BCG)感受态中,热诱导后,进行SDS-PAGE分析和免疫印迹检测。结果表明6个重组质粒在卡介苗中均有不同程度的表达,表达产物与理论推测的相对分子质量一致。Western blot结果显示其融合蛋白能被牛抗BVDV的阳性血清识别,具有相应的反应原性。本研究为进一步研究BVDV基因工程活载体疫苗奠定了基础。; 曾范利张云张梦时坤李建明刘菲李晶杜锐; 关键词：卡介苗

纤维素酶法提取天名精多糖: 2017年; 目的:研究纤维素酶法提取天名精多糖的最佳工艺。方法:采用浓硫酸-苯酚比色法,以葡萄糖为标准品,通过单因素结合正交试验的方法,优化天名精多糖的纤维素酶法提取工艺。结果:纤维素酶添加量0.8%、酶解p H 5.0、酶解温度50℃和酶解时间60 min为提取天名精多糖的最佳工艺条件,提取率为6.329%。结论:以纤维素酶法提取天名精多糖,方法合理、可行。; 包淑云丁然赵志刚; 关键词：天名精多糖提取纤维素酶正交设计

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究被引量：2: 2014年; 为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。; 李健明杨宇航王慧慧曾范利时坤张妍刘菲杜锐; 关键词：E2基因重组卡介苗

牛病毒性腹泻病毒E2基因优化表达重组卡介苗的免疫试验被引量：2: 2014年; 为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2基因优化表达重组卡介苗(rBCG)对小鼠的免疫效果,分别用已构建的pMV361-E2-1、pMV361-E2-2、pMV361-E2-3、pMV361-E2-4、pMV361-E2-5、pMV361-E2-6重组卡介苗,pMV361空载体,卡介苗,BVDV灭活疫苗和生理盐水对小鼠进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、T淋巴细胞增殖程度和CD4+、CD8+和IL-12的水平,以评价其免疫效果。结果显示,6组重组卡介苗均能够引起小鼠产生BVDV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,免疫小鼠血清CD4+、CD8+和IL-12的水平均高于对照组,pMV361-E2-1重组卡介苗在诱导小鼠产生BVDV抗体方面要优于其他各组基因重组卡介苗。结果表明,BVDV E2基因不同片段的重组卡介苗均可诱导免疫小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫,这为BVDV基因工程疫苗的研制奠定了基础。; 曾范利张云张梦时坤李建明郝俊伟孙凡婷杜锐; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因重组卡介苗免疫

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E_2基因重组卡介苗的构建: 2014年; 本试验将成功克隆的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因与大肠杆菌-分枝杆菌整合表达载体pMV361连接,构建重组整合质粒pMV361-E2。并确定了电转化的最佳条件:2.0 kV/cm、25μF、1 000Ω,成功获得了E2基因重组卡介苗。在45℃下热诱导E2基因在重组卡介苗中的表达,通过SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测,结果显示,在44 kD处出现目的条带,符合E2基因表达蛋白的大小,表明牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中成功表达。; 时坤王文玉王慧慧曾范利李健明杜锐; 关键词：E2基因

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博士科研启动基金(201209)