浙江省教育厅科研计划(20050716)
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 相关作者：罗冬娇严杰孙百莉郭宗琪孙军德更多>>
- 相关机构：杭州师范大学浙江大学四川省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划国家自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 我国主要问号钩端螺旋体血清群lipL21基因序列及其产物免疫反应性分析被引量：8
- 2006年
- 目的分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况。方法高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Patoc型PatocⅠ株基因组DNA中全长lipL21基因片段,T-A克隆后测序并构建其原核表达系统。分别用钩体TR/PatocⅠ和rLipL21兔抗血清为一抗的Western blot鉴定目的重组蛋白rLipL21的免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rLipL21兔抗血清的交叉凝集效价。以盐变-去垢剂处理法提取钩体外膜蛋白,用SDS-PAGE和免疫印迹法检测上述钩体株lipL21基因自然表达情况。结果上述钩体株均存在序列高度保守的lipL21基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98．75％～99．82％和99．46％～100％。rLipL21能与TR/PatocⅠ及rLipl21兔抗血清发生结合反应。rLipL21免疫家兔能产生抗体,该抗体对上述15株问号钩体MAT效价为1：16～1：128。问号钩体外膜标本中均可检出LipL21,双曲钩体则否。结论我国钩体群参考标准株均含有序列保守的lipL21基因并自然表达于外膜,双曲钩体PatocⅠ株虽含有lipL21基因但未表达。rLipL21具有良好的抗原性和免疫反应性,有可能作为新型钩体疫苗或检测试剂盒的候选属特异性表面抗原之一。
- 罗冬娇胡野孙百莉田菊霞胡美多严杰
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白
- 问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测被引量：1
- 2007年
- 寻找钩体属特异性保护抗原，对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值。Cullen等首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因。我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因。已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫。我们采用显微镜凝集试验（MAT）检测了156份钩体病人血清的凝集效价，并建立rLipL21-IgM／IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测。
- 罗冬娇郭宗琪孙百莉蒋晓崎周金成严杰
- 关键词：抗体检测病人血清问号钩端螺旋体免疫保护作用
- 问号钩端螺旋体致病物质及其作用机制研究进展
- 2007年
- 问号钩端螺旋体(简称钩体)感染引起的钩体病是全球流行最广的人兽共患病。由于问号钩体无外毒素,所含有的内毒素样物质也不能合理地解释其致病性,故问号钩体致病机制至今未明。近年国外学者分别报道了问号钩体内鞭毛、一些糖脂或糖肽类物质、溶血素、部分外膜蛋白分别与体外生存、侵袭力、粘附宿主细胞、细胞膜损伤、诱导炎症因子和细胞凋亡等有关,从而与问号钩体致病密切相关。研究资料还提示,问号钩体致病机制可能与传统的细菌主要以内、外毒素致病有明显差异。
- 周金成罗冬娇
- 关键词：钩端螺旋体侵袭力鞭毛
- 钩端螺旋体主要属特异性蛋白抗原分布及其免疫性研究被引量：4
- 2006年
- 目的确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据。方法采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和rLipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2,并用SDS-PAGE检测表达及提纯效果。上述重组蛋白常规皮下免疫家兔获得抗血清,显微镜凝集试验(MAT)检测各抗血清交叉凝集效价。采用盐变法提取了我国15群问号钩体参考标准株及非致病的双曲钩体PatocⅠ株的外膜蛋白。以兔抗血清为一抗,采用Western blot检测上述4种外膜蛋白自然表达情况及其免疫反应性。结果rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和r LipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2表达量分别约占细菌总蛋白的10％、40％和35％、15％和10％、30％和15％,各重组蛋白SDS-PAGE提纯后均仅见单一的蛋白条带。重组蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型表达产物之间有广泛的交叉免疫反应性,与不同钩体血清群的MAT效价为1:2-1:128。各血清群钩体外膜中均可检出上述4种外膜蛋白,但LipL21仅存在于问号钩体中。结论LipL21、LipL32、LipL41、OmpL,1均为钩体属特异性表面抗原,可作为通用性钩体疫苗及检测试剂盒的候选抗原。
- 孙百莉罗冬娇孙军德严杰
- 关键词：问号钩端螺旋体外膜蛋白交叉凝集
- 问号钩端螺旋体属特异性OmpL1s抗原膜定位及其自然抗体应答被引量：5
- 2007年
- 为了确定问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性OmpL1s抗原膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型,为OmpL1s用于研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒抗原提供依据。采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区156份钩体病人血清标本。用PCR和核苷酸序列分析,了解中国流行的钩体主要血清群ompL1基因型。采用常规基因工程技术构建ompL1/1和ompL1/2主要基因型原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rOmpL1/1和rOmpL1/2。采用胶体金免疫电镜技术,对OmpL1s进行膜定位。建立了基于rOmpL1s的ELISAs,检测钩体病人血清中特异性抗体水平及其类型。试验结果表明,黄疸出血群钩体仍然是四川地区最主要的优势钩体血清群。中国流行的钩体主要血清群ompL1基因可有ompL1/1和ompL1/2两个基因型,两者核苷酸和氨基酸序列相似性之间有较明显的差异。OmpL1s是位于钩体外膜表面的蛋白分子。不同稀释度的156例钩体病人血清标本中,rOmpL1/1和rOmpL1/2特异性IgM阳性率分别为67.9%～79.5%和75.0%～75.6%,特异性IgG阳性率分别为71.8%～79.5%和75.0%～76.9%。上述试验结果提示,OmpL1s是位于钩体表面属特异性蛋白抗原。自然感染钩体时,rOmpL1/1和rOmpL1/2均可诱导机体体液免疫应答并产生IgM和IgG两类血清抗体,且两者之间有广泛的抗原交叉反应。rOmpL1/1和rOmpL1/2可作为研制通用性钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原。
- 孙百莉郭宗琪罗冬娇孙军德严杰
- 关键词：问号钩端螺旋体分子定位
- 问号钩端螺旋体脂蛋白LipL32膜定位及其免疫应答
- 2008年
- 目的确定问号钩端螺旋体（简称钩体）属特异性脂蛋白抗原LipL32膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型。方法IPTG诱导目的重组蛋白rLipL32-1和rLipL32-2表达，Ni-NTA亲和层析法提纯rLipL32。采用显微镜凝集试验（MAT）检测四川地区钩体患者血清标本及rLipL32兔抗血清与我国问号钩体参考标准株的交叉凝集情况。采用胶体金免疫电镜技术对LipL32进行膜定位。建立基于rLipL32的ELISA，检测钩体患者血清中特异性抗体类型及其水平。结果黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群。rLipL32兔抗血清均能与我国问号钩体参考标准株发生MAT效价为1：80～1：320的交叉凝集反应。LipL32是位于钩体外膜表面的蛋白质分子。156例MAT阳性钩体患者血清标本中，rLipL32-1和rLipL32-2特异性IgM阳性率分别为91．0％～92．9％和90．4％～92．3％，特异性IgG阳性率分别为99．4％和97．4％～98．1％。结论LipL32是问号钩体属特异性表面蛋白抗原。自然感染钩体时，LipL32-1和LipL32-2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体。rLipL32-1和rLipL32-2可作为研制检测试剂盒的候选抗原。
- 罗冬娇郭宗琪胡野孙百莉潘建平严杰
- 关键词：问号钩端螺旋体抗原定位免疫应答
