国家自然科学基金(81201281H1904)
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 相关作者：朱丽华章广玲张庆波熊亚南刘志勇更多>>
- 相关机构：河北联合大学河北联合大学附属医院唐山市协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省科技厅科研项目唐山市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黄芪桂枝五物汤不同剂量配伍对皂苷含量的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨黄芪桂枝五物汤中各单味药对黄芪总皂苷含量的影响,为黄芪桂枝五物汤的药效学研究提供实验依据。方法采用均匀设计法设置5因素11水平,考察黄芪总皂苷的含量,用计算机处理数据,多元回归分析实验结果。结果各单味药对总皂苷贡献大小分别为:黄芪(61.5%),白芍(6.68%),大枣(2.63%),生姜(2.09%),桂枝(0.446%)。结论在黄芪桂枝五物汤中,虽然黄芪对黄芪总皂苷的贡献最大,但其他各味中药对黄芪总皂苷的含量也会产生不同程度的影响。
- 朱丽华史国友张庆波刘东红曹秀华石恩富丁贺田
- 关键词：黄芪桂枝五物汤皂苷均匀设计法配伍
- 黄芪甲苷对免疫功能影响的体外实验研究被引量：13
- 2014年
- 目的探讨黄芪甲苷对机体免疫功能的影响,从而为临床应用和工业化生产提供参考。方法用黄芪甲苷作用于小鼠脾细胞,进行培养采用血球计数板测定细胞增殖活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)测细胞因子(IL-2,IFN-γ)含量;流式细胞仪(FCM)检测细胞表型变化。结果黄芪实验组淋巴细胞增殖活性显著低于对照组(P<0.01);实验组IL-2,IFN-γ的浓度比对照组低;细胞表型分析显示黄芪甲苷既能抑制T淋巴细胞增殖,也能抑制B淋巴细胞增殖。结论黄芪甲苷对免疫功能具有抑制作用。
- 丁贺田朱丽华张庆波刘东红曹秀华石恩富鄂静文
- 关键词：黄芪桂枝五物汤黄芪甲苷细胞免疫体液免疫
- 胃腺癌细胞中miR-23a靶基因PPP2R5E的鉴定被引量：4
- 2015年
- 目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证mi R-23a的靶基因PPP2R5E。方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pc DNA3/EGFP,将PPP2R5E-3’UTR的特异性序列插入其中,并与红色荧光蛋白表达质粒p Ds Red2-N1及表达mi R-23a的质粒共同稳定转染胃腺癌细胞MGC803,稳定转染后提取细胞蛋白,荧光分光光度计进行定量检测。并通过半定量RT-PCR、实时定量PCR检测mi R-23a功能受抑制或过表达mi R-23a的MGC803细胞或胃腺癌组织中PPP2R5E基因m RNA的表达情况,验证mi R-23a对其调控作用。表达si RNA抑制MGC803中PPP2R5E m RNA的表达后,通过MTT和平板克隆形成实验观察其对胃腺癌细胞系MGC803细胞活性和克隆形成能力的影响。结果绿色荧光蛋白的表达量,稳定转染pc DNA3/EGFPPPP2R5E-3’UTR质粒和mi R-23a质粒组明显低于pc DNA3/EGFP-PPP2R5E-3’UTR和pc DNA3共同稳定转染组。mi R-23a功能受抑制的胃腺癌细胞MGC803中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平升高;相反,过表达mi R-23a的胃腺癌细胞MGC803及胃腺癌组织中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平下降。沉默MGC803细胞中的PPP2R5E后,细胞活性和克隆形成能力均加强。结论 PPP2R5E可能是mi R-23a的直接靶基因。
- 朱丽华李盖刘爱华张科李冀章广玲
- 关键词：胃腺癌MGC803MI靶基因
- 低浓度力达霉素对人白血病细胞K562增殖的抑制作用
- 2015年
- 目的探讨低浓度力达霉素(LDM)对人白血病细胞K562增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法以不同浓度LDM处理K562细胞48 h,通过MTT法检测LDM对细胞增殖的抑制作用;利用苔盼蓝染色对细胞活性进行测定;利用瑞氏-姬姆萨染色法观察LDM对细胞形态的影响;Elisa法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在细胞培养上清中的表达;采用Western Blot检测凋亡相关蛋白TNF-α的表达。结果 LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,用10-12、10-11、10-10、10-9、10-8mol/L浓度的LDM分别作用K562细胞48 h,抑制率分别为(21.2±2.48)%、(37.5±0.88)%、(52.1±1.24)%、(64.5±1.61)%和(71.3±2.00)%。通过瑞氏姬姆萨染色,荧光显微镜下可见胞膜皱缩,有泡状突起及不规则凹陷,胞核染色质浓缩,固缩,浓染,断裂成团块分散在胞膜周边。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清,LDM处理组与对照组相比,TNF-α表达水平升高。Western Blot分析显示,分别用10-8、10-10、10-12 mol/L浓度的LDM处理细胞48 h后,TNF-α蛋白的表达量依次为0.42±0.01、1.67±0.13(P<0.01)和2.41±0.08(P<0.01),与对照组0.23±0.02相比,吸光度值比升高。结论低浓度LDM可能通过上调TNF-α表达水平诱导K562细胞凋亡抑制其增殖。
- 穆丹张志斌章广玲刘志勇陈静
- 关键词：力达霉素K562细胞增殖细胞凋亡
- 某高校大学生浅部真菌感染及其病原学特征分析
- 2016年
- 目的了解在校大学生主要的浅部感染真菌类型、治疗情况及危险因素,为浅部感染真菌病临床预防和治疗提供一定的实验依据。方法设计调查表并进行预调查,进一步修改完善调查表,对唐山市某高校2 038名在校大学生统一进行现场调查,使用SPSS 19.0软件对调查结果进行统计分析;结合调查结果目测观察选取其中可疑者,常规显微镜下检查,镜检阳性者将标本进一步培养,观察菌落形态特征及孢子和菌丝的类型,将分离出的菌种进行相关的生化试验和基因型的鉴定。结果男女之间足癣、甲癣、股癣患病率差异均有统计学意义(P均<0.05);男女之间头癣、手癣、汗斑差异均无统计学意义(P均>0.05)。临床医学生和非临床医学生之间足癣患病率差异有统计学意义(P<0.05);临床医学生和非临床医学生之间头癣、手癣、甲癣、股癣、汗斑差异均无统计学意义(P均>0.05)。从调查数据来看,足癣患病数最多,再次是手癣,股癣最低。该校大学生浅部感染真菌初步鉴定共有6种,以红色毛癣菌为主。结论大学生浅部真菌病患病率较高,尤以足癣患病率最高;大学生对浅部感染真菌的基本知识及预防治疗认知不足,应加强此方面知识的传授,以减少浅部真菌感染的可能性。
- 杨宗哲李航航张增祥陈泉志李盖朱丽华
- 关键词：大学生病原学特征
- MiR-23a质粒的构建及其在胃腺癌细胞系MGC803中的表达被引量：4
- 2014年
- 目的构建表达微小RNA-23a(miR-23a)的真核表达质粒,为进一步研究小RNA分子miR-23a在胃腺癌细胞系MGC803中的功能奠定良好的实验基础。方法首先设计并合成扩增miR-23a前体基因全长的PCR引物,提取胃腺癌细胞系MGC803基因组为模板,PCR扩增大小为324 bp的目的基因;PCR产物经过EcoR I和Bgl II酶切后,与线性化的pcDNA3载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒经脂质体方法转染MGC803细胞,实时定量PCR检测转染细胞MGC803中miR-23a的表达水平,经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及Transwell实验,观察过表达miR-23a后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果纯化质粒的相对分子质量为5.7 kb,酶切及测序鉴定结果符合目的条带大小(324 bp),插入的寡核苷酸序列与miR-23a前体基因序列完全相符;实时定量PCR结果表明pcDNA3/miR-23a能够有效表达miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,过表达miR-23a可以促进MGC803细胞活性;TUNEL实验结果显示,过表达miR-23a可以减少胃腺癌细胞MGC803凋亡的发生;Transwell实验结果显示miR-23a可以促进胃腺癌细胞MGC803的侵袭能力。结论构建的真核表达质粒在胃腺癌细胞MGC803中有效表达miR-23a,能够促进细胞活性及侵袭能力,并能抑制凋亡的发生。
- 陈力王梅梅周洪霞熊亚南章广玲李淑英袁丽杰朱丽华
- 关键词：细胞活性凋亡
- miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的:利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法:实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR(miR-205互补位点)点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mutYES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果:与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组(P<0.05);YES1-3′UTR与miR-205mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组(P<0.01);YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组(P<0.05)。结论:miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。
- 程远甄永占郝晓方邬鹏宇熊亚南刘志勇崔和勤
- 关键词：肺肿瘤细胞增殖
