浙江省科技计划项目(011110541)
- 作品数：5 被引量：23H指数：2
- 相关作者：郑树彭佳萍方晓明姜朝晖方晓明更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江大学医学院附属第二医院解放军第一一七医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5-氮-2′-脱氧胞苷对RKO结肠癌细胞株p16/CDKN2基因去甲基化的转录调节作用被引量：17
- 2003年
- 目的 探讨DNA 5′CpG岛去甲基化对RKO结肠癌细胞株p16 CDKN2抑癌基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响 ,寻找抗癌治疗的新靶点。方法 用特异性DNA甲基转移酶抑制剂 5 氮 2′ 脱氧胞苷 (5 Aza 2′ deoxycytidine)作用结肠癌细胞株 72h后 ,甲基特异性PCR(Methylation specificPCR ,MSP)、T A克隆及DNA测序分析甲基化状态 ,四唑盐 (MTT)比色、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、荧光定量PCR(Real timePCR)、免疫组织化学染色 (IHC)及蛋白印迹 (Westernblot)检测用药前后RKO细胞株生长倍增时间以及对p16 CDKN2mRNA及蛋白表达的影响。结果 (1)未经 5 Aza deoxycytidine作用的对照组RKO细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变 ,而经 5 Aza CdR作用的RKO结肠癌细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶 ;(2 )与对照组相比 ,3组不同浓度 5 Aza 2′ deoxycytidine均能明显抑制肿瘤细胞生长 ,倍增时间分别增加了 1 4 9、1 6 4、1 87倍 ;(3)经 5 Aza 2′ deoxycytidine作用后 ,p16 CDKN2基因mRNA表达分别增加了 4 89、16 91、19 97倍 ,而DNA甲基转移酶mRNA表达显著降低 ;(4 )免疫组化染色和蛋白印迹均显示 ,经处理后的肿瘤细胞p16 CDKN2蛋白表达呈明显增强。结论 DNA异常甲基化与RKO结肠癌细胞有?
- 方晓明孙立峰彭佳萍董琦郑树
- 关键词：结肠癌CDKN2基因
- 人肠癌RKO细胞周期依赖性激抑制因子基因启动子区甲基化状态的研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子（CKIs）家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征。方法应用特异性DNA甲基转移酶（DNMTs）抑制剂5-Aza-2’-deoxycytidine（5-Aza-CdR）处理肠癌细胞，甲基特异性聚合酶链反应（Methylation—Specific PCR，MSP）、T—A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15^ink4b、p16^ink4a／CDKN2、p21／cip、p27／kip启动子CpG岛甲基化状态。结果未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞，其p15^ink4b、p16^ink4a／CDKN2基因组DNA胞嘧啶（C）保持不变，这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态；而经5-Aza—CdR作用的肠癌RKO细胞，其p15^ink4b、p16^ink4a／CDKN2、p21／cip和p27／kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶，表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态。结论肠癌RKO细胞周期INK4家族（p15^ink4b和p16^ink4a／CDKN2）基因的启动子区处于异常的高甲基化状态，而KIP／CIP家族（p21／cip和p27／kip）基因未处于高甲基化状态；5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态。
- 方晓明姜朝晖彭佳萍孙立峰郑树
- 关键词：结肠肿瘤甲基化启动子
- 激酶4抑制因子家族基因表达的激活对肠癌细胞增殖侵袭的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨激活激酶4抑制因子（INK4）家族（P15ink4b和P16ink4a／CDKN2）基因表达对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用1×10^-7、5×10^-7及1×10^-6mol／L不同浓度的特异性DNA甲基转移酶抑制剂（5-Aza-CdR）对结肠癌RKO细胞进行去甲基化处理（分别为A、B、C3个实验组），另设阳性对照组（未经处理的RKO细胞）。Western blot法检测INK4家族基因的蛋白表达：软琼脂克隆细胞集落实验评估体外致瘤情况；Transwell小室实验评估体外迁移情况。将各组RKO细胞注射BALB／c裸鼠（每组10只），通过称量瘤体的重量和体积评估体内成瘤情况。结果A、B、C3组实验组细胞中P15ink4b和P16ink4a／CDKN2蛋白表达分别为阳性对照组的1．13、1．38、1．92倍和1．11、1．45、2．14倍。体外实验显示，B组和C组的细胞集落数明显少于阳性对照组（P〈0．05）；3组实验组的细胞迁移数均明显少于阳性对照组（P〈0．05）。体内实验显示，相对于阳性对照组，3组实验组裸鼠的抑瘤率分别为2．1％、16．8％和26．2％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论激活INK4家族基因的表达能有效抑制结肠癌细胞的增殖和迁移。
- 方晓明姜朝晖彭佳萍姚宁方旭东郑树
- 关键词：结直肠肿瘤细胞迁移
- 甲基化干预对小鼠大肠癌生长及p16／CDKN2基因表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2’脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对小鼠大肠癌发生发展的影响及其与细胞周期依赖性激酶抑制因子p16／CDKN：mRNA表达的关系。方法4JD只雄性KM小鼠按随机数字表法随机分为2组：1，2-二甲肼（DMH）诱癌组和甲基化干预组，每组20只。小鼠皮下注射DMH25mg／kg，每周1次，连续22周，以诱发小鼠大肠癌，甲基化干预组于12周开始皮下注射5-Aza-CdR。另选同来源雄性KM小鼠作为未诱癌对照组（阴性对照组）10只，于皮下按25mg／kg注射生理盐水，每周1次，连续22周。“席卷法”收集肿瘤组织，HE染色观察肿瘤发生的数目、类型及浸润程度；免疫组织化学染色观察细胞增殖核抗原（PCNA）蛋白表达情况；原位杂交技术检测肠癌组织抑癌基因p16／CDKN，mRNA的表达。结果（1）DMH诱癌组肿瘤数达（7．6±3．1）个／只，而甲基化干预组诱癌数为（3．4±1．8）个／只，且以重度异性增生为主，浸润癌的发生率明显低于DMH诱癌组（P〈0．05〉。（2）DMH诱癌组19只小鼠中PCNA阳性表达16只，明显多于甲基化干预组（19只中11只阳性表达）及未诱癌对照组（0只，均P〈0．05）。（3）DMH诱癌组有明显p16／CDKN：mRNA杂交信号（蓝紫色），主要位于胞质，但甲基化干预组染色显然较DMH诱癌组强，尤其以瘤灶部位明显。结论早期5-Aza—CdR的干预能显著抑制小鼠大肠癌的发生发展，其抑制肿瘤机制可能是通过激活抑制因子p16／CDKN2的表达。
- 方晓明姜朝晖姚宁丁小文彭佳萍郑树
- 关键词：甲基化肠肿瘤原位杂交
- 启动子区5′CpG岛去甲基化对人结肠癌细胞生物学表型的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人结肠癌RKO细胞增殖凋亡等生物学特征的关系。方法:应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72h,甲基化特异性PCR(methylation-specificPCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2基因CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。结果:DNMTs抑制剂能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P<0.01),诱导肠癌细胞凋亡,影响肠癌细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系。结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。
- 方晓明郑树陈功星孙立峰吕庆华
- 关键词：甲基化结直肠肿瘤脱氧胞苷
