北京市自然科学基金(5083025)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：江均平龚霄周露王义春王龑更多>>
- 相关机构：中国农业科学院农产品加工研究所西南大学湖南农业大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 基于pHY300PLK的分泌表达载体的构建
- 2013年
- 用PCR、酶切、连接方法将地衣芽孢杆菌耐高温α淀粉酶基因(amy)表达单元(包括启动子、信号肽及淀粉酶基因)克隆到pHY300PLK中,并用反向PCR、同源重组方法,去除重组质粒的氨芐抗性基因,以利用α淀粉酶基因的启动子和信号肽高效表达自身蛋白及外源蛋白。结果表明:连入了α淀粉酶表达单元的pHY300PLK,即pAMY质粒能够分泌表达α淀粉酶,且去除了氨苄抗性基因的pAMY质粒,即pAMY1质粒能更有效的表达α淀粉酶;将纤维素酶基因连接到pAMY1质粒中淀粉酶信号肽的下游,得到的重组质粒pCEL能分泌表达纤维素酶,表明α淀粉酶基因的启动子和信号肽不仅能启动自身蛋白的表达,也能启动外源蛋白的表达;重组菌的生长情况与质粒拷贝数的比较表明,与PAMY质粒相比去除了氨苄抗性基因的pAMY1质粒对重组菌的生长没有影响,且pAMY1质粒在重组菌的复制效率更高,能更高效的表达蛋白,以上结果证明pHY300PLK克隆质粒已成功改造成表达质粒,下一步可用于更多外源基因的分泌表达。
- 覃君君江均平李春红戴良英
- 关键词：地衣芽孢杆菌Α淀粉酶同源重组表达质粒纤维素酶分泌表达
- 泡盛曲霉AS 2437菌株的酶系分析被引量：5
- 2009年
- 泡盛曲霉(Asp.awamori)是曲霉属中具有重要应用前景的菌株之一,利用该菌可以制备多种酶制剂。本实验对泡盛曲霉AS2437菌株酶系组成进行了分析。用不同原料进行液体发酵,麸皮产酶水平最高、豆皮次之,米糠最低;麸皮培养基发酵液中木聚糖酶、纤维素酶和淀粉酶的酶活力分别达到25.35、0.64、29.97U/mL,粗蛋白含量169.00μg/mL;在培养基中添加葡萄糖,三种酶的产量均有不同程度的降低。
- 龚霄江均平贺稚非
- 关键词：泡盛曲霉木聚糖酶纤维素酶淀粉酶
- 玉米赤霉烯酮降解酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达被引量：6
- 2020年
- 通过密码子优化、体外多拷贝构建实现玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)降解酶基因(zlhy-6)在毕赤酵母GS115菌株中的高效表达。按酵母密码子偏好性优化zlhy-6基因的密码子,与α因子信号肽编码序列一起合成,插入到pAO815质粒中,通过酶切酶连构建含1–6个表达盒的表达质粒,将其转入毕赤酵母GS115菌中,获得ZEN降解酶重组菌株。重组蛋白分子量为28.9 kDa,与预期一致。重组菌用甲醇诱导3 d,蛋白浓度达最高,之后下降;在pH 5.0、4.5条件下诱导培养,表达量最高;每天添加0.8%的甲醇、接种量10%表达水平最高;4拷贝的转化子表达水平最高,三角瓶发酵3 d,酶活性达到10 U/mL。在1 g玉米渣中添加0.1–0.5 mL发酵上清液,水解24 h,玉米渣中ZEN的降解率为44.08%–75.51%。研究结果为ZEN降解酶工业生产及在食品饲料中的应用奠定了基础。
- 王义春王龑江均平赵月菊邢福国周露
- 关键词：玉米赤霉烯酮降解多拷贝毕赤酵母
- 热稳定高比活纤维素酶在Pichia pastoris中的表达研究被引量：1
- 2010年
- Bacillus amyoliquefaciens DL-3纤维素酶具有热稳定高比活多功能的酶学特性,本文根据该酶的氨基酸序列合成了其编码基因(cel),构建了pPIC9K-cel表达载体,并用P.pastoris进行了表达。工程菌株三角瓶发酵酶活性达0.50 U/mL,酶解滤纸的产物为低聚糖,表明人工合成的热稳定高比活纤维素酶基因在P.pastoris中可以正常表达、加工及分泌,重组酶的分子量由天然酶的53 kDa增加至68 kDa,糖基化严重。
- 江均平蔡丽君龚霄张杰魏益民
- 关键词：纤维素酶毕赤酵母糖基化
