温州市科技局科研基金(Y20100184)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- GST与FGF23 C末端71个氨基酸融合蛋白的表达、纯化及其免疫原性
- 2012年
- 目的:构建和表达谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与成纤维细胞生长因子23(FGF-23)的活性片段-C末端71个氨基酸(FGF23CTR)融合蛋白的基因工程菌,并检测融合蛋白的免疫原性,为制备FGF23特异性单克隆抗体以及研发慢性肾病诊断试剂提供实验数据。方法:以质粒pET22b-fgf23为模板利用PCR方法扩增FGF23CTR的基因片段,将该基因与表达载体pGEX-4T-1连接后转化至BL21宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将GST-FGF23CTR融合蛋白用Glutathione Sepharose4B亲和层析法纯化,Western blotting法鉴定蛋白。该融合蛋白免疫Balb/C小鼠制备抗血清,采用ELISA法检测抗血清的效价。结果:构建GST-FGF23CTR融合蛋白的表达载体,纯化后得到纯度90%以上的融合蛋白,并与商品化的FGF23多克隆抗体呈阳性反应,ELISA法证实融合蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功构建GST-FGF23CTR融合蛋白基因工程菌,并纯化得到具有良好免疫原性的融合蛋白,以此方法制备的抗原可用于FGF23特异性单克隆抗体的制备和FGF23生物学功能研究。
- 陈玉斌刘孝菊姚娜孙常文田海山张键刘敏李校堃
- 关键词：成纤维细胞生长因子23免疫原性基因工程菌
