国家自然科学基金(30572159)
- 作品数：6 被引量：27H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学西南医院重庆市涪陵中心医院更多>>
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- VEGF-C基因RNA干扰真核表达载体的构建及其效果鉴定
- 2007年
- 目的:构建VEGF-C基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法:以VEGF-C为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的VEGF-C基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pGenSil-VEGF-C质粒转染LOVO细胞48小时,检测其对LOVO细胞VEGF-C蛋白与mRNA表达的影响。结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低Lovo细胞VEGF-C的蛋白和mRNA表达,重组载体构建成功。结论:利用RNAi技术可成功构建抑制VEGF-C表达的小干扰RNA重组体。
- 周琪梁后杰阎晓初彭秋平周进明吴峰陈龙边志衡
- 关键词：RNA干扰真核表达载体
- NRP2表达抑制对结肠癌细胞LoVo移植瘤淋巴管生成和转移的影响被引量：7
- 2009年
- 目的:探讨抑制Neuropilins-2(NRP2)基因表达对结肠癌淋巴管生成和转移的影响。方法:采用RNA干扰(RNAi)下调结肠癌LoVo细胞株NRP2表达,接种NRP2 RNAi的LoVo细胞株于裸鼠,建立裸鼠结肠癌结肠原位移植瘤模型,分别观察移植后4、6、8和12周裸鼠结肠原位移植瘤淋巴管生成以及转移的情况。结果:成功建立结肠癌裸鼠原位移植瘤动物模型。下调结肠癌LoVo细胞株NRP2表达能显著降低裸鼠结肠原位移植瘤的淋巴管密度以及远处转移。结论:抑制NRP2表达可以抑制结肠癌的淋巴管生成和转移,它将是一个潜在的肿瘤治疗靶点。
- 周琪梁后杰阎晓初彭秋平周进明吴峰高俊勇刘以淑
- 关键词：RNA干扰移植瘤淋巴管生成
- 人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立被引量：12
- 2007年
- 目的建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型。方法使用对数生长期的人结肠癌细胞(lovo)在8只裸鼠结肠浆膜至黏膜逐层注射,以完成原位移植瘤模型的制备,同时皮下种植8只裸鼠作为对照组。分别于第4、6、8、12周各组分别处死裸鼠2只,观察原位种植肿瘤的成瘤率、生长情况、转移率和腹水出现率。结果16只裸鼠实验期间无1只死亡,成瘤率为100%,原位种植成瘤率为100%(8/8),区域淋巴结转移率100%(8/8),肝转移率为100%(8/8),肺脏转移率为75.0%(6/8),腹膜转移率为75.0%(6/8),腹水出现率为27.5%(3/8)。皮下种植组未见转移。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,该模型的生物学行为与临床病程非常相似,为研究人结肠癌转移机制和干预措施提供了较为理想的动物模型。
- 周琪梁后杰阎晓初边志衡周进明彭秋平吴峰潘凤
- 关键词：结肠癌裸鼠原位移植
- 结肠癌组织NRP2的表达与淋巴结转移的关系被引量：9
- 2009年
- 目的:探讨结肠癌组织中NRP2的表达在淋巴管生成和转移中的作用。方法:采用免疫组化法、RT-PCR法检测结肠癌组织中NRP2和VEGF-C的表达,以及结肠癌组织淋巴管的免疫组化标记和微淋巴管密度(MLD)计数。结果:结肠癌组织周围区域(48.8±23.5)、表浅区域(24.6±10.1)和肿瘤中心(11.3±7.7)MLD存在显著差异(P<0.05);结肠癌组织NRP2的mRNA水平为0.87±0.26,高于正常组织0.38±0.12,转移组的mRNA水平为1.12±0.25,也高于非转移组的0.76±0.19(P<0.01)。NRP2表达定位于结肠癌细胞浆和部分淋巴管内皮细胞浆,阳性率为34.8%;其表达与肿瘤边缘及标记部位MLD呈正相关(r=0.432,P<0.01),并与肿瘤的淋巴结转移、分化程度、Dukes分期和浸润深度相关(P<0.05),与VEGF-C的表达亦呈正相关(r=0.606,P=0.001)。结论:NRP2表达可能对结肠癌局部淋巴管生成及淋巴结转移起到重要的作用。
- 周琪梁后杰阎晓初彭秋平周进明吴峰龙艺刘以淑
- 关键词：VEGF-C淋巴管生成
- RNA干扰Neuropilins-2基因真核表达载体的构建及其鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达。结果经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功。重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低。结论利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体。
- 周琪梁后杰阎晓初彭秋平周进明吴峰钟大平边志衡
- 关键词：RNA干扰真核表达载体
- 抑制NRP2表达对淋巴管内皮细胞小管成型的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨抑制神经纤毛蛋白质2(NRP2)基因表达对人淋巴管内皮细胞(LECs)体外形成小管能力的影响。方法从人新鲜包皮中分离纯化LECs,并进行鉴定。实验设NRP2-RNAi/LECs组、mock/LECs组和hECs组,三组分别转染pGensil-NRP2(携带NRP2 siRNA的真核表达载体)、pGensil-1(空载体)及正常LECs细胞。采用RT-PCR和Western blotting检测NRP2 mRNA和蛋白的表达;绘制细胞生长曲线以观察各组细胞生长的差异。对细胞进行三维胶培养,计数小管样结构的数量,并测量小管外径、内径和管壁厚度。结果与hECs组和mock/LECs组比较,NRP2-RNAi/LECs组NRP2表达水平明显下调(P<0.05),而前两组间无显著差异(P>0.05)。生长曲线显示三组细胞的增殖能力无显著差异,均于接种后3～5d进入对数生长期,6～7d进入停滞期。三维胶培养形成的管样结构在NRP2-RNAi/LECs组很少见,其管样结构的数量及小管外径、内径、管壁厚度都明显低于mock/LECs组和hECs组(P<0.05),而后两组间无显著差异(P>0.05)。结论抑制NRP2的表达可抑制LECs在体外形成小管的能力,并可能抑制肿瘤淋巴管的生成。
- 周琪梁后杰阎晓初彭秋平周进明吴峰高俊勇吕仁明
- 关键词：RNA干扰
