国家科技重大专项(2009ZX08006-004B)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 相关作者：吴圣龙包文斌朱璟杜子栋潘章源更多>>
- 相关机构：扬州大学安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省科技支撑计划项目江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪β防御素-1基因乳腺特异性表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 为构建标记基因可去除的β防御素-1(pBD-1)基因乳腺特异性表达载体,利用RT-PCR方法从猪脾脏中克隆获得pBD-1基因,再插入乳腺特异性表达骨架载体pBC1-neo中;经PCR、酶切电泳以及测序鉴定,确认成功构建出乳腺特异性表达pBD-1的载体。进一步将上述功能片段亚克隆至能将标记基因全部去除的骨架载体MCS-3s-loxP-GFP中,成功构建了一种筛选标记可全部去除的乳腺特异性3s-loxP-GFP-pBC1-pBD1转基因载体。该载体为研究pBD-1蛋白的抗菌活性、抗菌机制,以及创制乳腺高效表达pBD-1的转基因猪育种新材料和通过哺乳以提高新生仔猪抗病力奠定了基础。
- 陈建文刘星范彩云李运生包文斌吴圣龙章孝荣张运海
- 关键词：抗病育种乳腺生物反应器转基因动物
- 11个猪群体BPI基因第10外显子HpaⅡ遗传变异分析被引量：5
- 2011年
- 本研究旨在对猪杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)基因的多态性进行系统分析,为今后探讨猪BPI基因与疾病抗性的关系提供理论依据。采用PCR-RFLP方法对野猪和国内外10个猪品种BPI基因第10外显子HpaⅡ遗传变异进行检测及序列分析。结果表明:11个猪品种中共检测到AA、BB和AB 3种基因型,2个等位基因,其中野猪、藏猪、荣昌猪和淮猪群体中AA基因型为优势基因型,A等位基因为优势等位基因;外来商业化猪品种中,杜洛克群体AA基因型频率较高。序列分析表明AA基因型与GenBank中的序列一致,BB基因型存在A27G同义突变位点和T118G错义突变位点。基于BPI基因的等位基因频率构建11个猪群体的系统发生树,第1类群包括野猪、淮猪、藏猪、荣昌猪、杜洛克;第2类包括约克夏、长白猪、枫泾猪、梅山猪、二花脸、苏太猪。本研究结果显示,猪群体间基于BPI基因多态性上存在的差异与体型、生产类型及地理分布等因素没有显著的联系。
- 朱璟潘章源訾臣刘璐杜子栋黄小国吴圣龙包文斌
- 关键词：多态性抗病育种
- 猪TLR4基因在F18大肠杆菌抗性型和敏感型资源群体间的差异表达分析被引量：7
- 2011年
- 本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平,为探讨该基因在免疫识别和F18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首先,各取8头35日龄F18大肠杆菌抗性型和敏感型苏太仔猪组织样,包括心脏、肝脏、脾脏等11个组织,提取总RNA,以GAPDH基因为内参基因,进行实时荧光定量PCR。对TLR4基因mR-NA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算TLR4基因mRNA在各个组织以及F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间表达量。结果显示,TLR4 mRNA在猪各种组织中广泛表达,在肺、淋巴结、肾脏和脾脏等免疫器官中表达量较高,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量普遍高于抗性型个体的表达量,在各个组织中(除胃外)TLR4表达量差异倍数从1.083到2.980不等;在肺、淋巴结、肾脏和胸腺组织中,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量显著高于抗性型个体的表达量(P<0.05)。本研究结果表明,TLR4基因通过天然免疫识别机制对猪F18大肠杆菌病等革兰氏阴性疾病有一定的影响,TLR4基因表达量的下调与F18大肠杆菌的抗性具有一定程度的关系。
- 包文斌潘章源朱璟叶兰杜子栋蔡家嘉黄小国朱国强吴圣龙
- 关键词：F18大肠杆菌REAL-TIME表达谱
- 安庆六白猪和梅山猪成纤维细胞体外培养与生物学特性被引量：1
- 2011年
- 为探索借助细胞培养技术开展地方良种猪遗传资源保护,以30日龄安庆六白猪耳缘皮肤组织和妊娠40d左右梅山猪胎儿皮肤组织为材料,采取组织块接种培养法及胰蛋白酶消化法分离培养成纤维细胞,并对所获得的细胞系的体外培养生物学特性进行检测,包括细胞形态学观察和生长曲线绘制。结果表明:获得的安庆六白猪和梅山猪细胞系符合成纤维细胞的基本特征,细胞贴壁生长状态呈典型的梭型、星型或多边形,细胞间连接紧密,成片生长,生长曲线呈典型的"S"状。结果提示通过组织块接种培养法或胰蛋白酶消化法,成功地建立4头雄性安庆六白猪和15只梅山猪胎儿的19个成纤维细胞系。
- 季索菲包文斌曹鸿国王恒李运生随刘才桂涛吴圣龙章孝荣张运海
- 关键词：梅山猪成纤维细胞细胞培养
