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基于SVM的鱼类胚胎冷冻保存试验设计被引量：1: 2009年; 在海洋鱼类胚胎冷冻保存试验中,为了解决试验材料有限,潜在的设计方案巨量的问题,笔者试图将专门解决有限样本下学习规律的支持向量机应用于此领域.采用LIBSVM和BSVM软件包中的多分类算法对不同抗冻剂、不同浓度、不同平衡时间下的组合方案进行筛选,经生物试验验证具有较高的预测准确率,为生物试验设计提供了一种新的思路和方法.; 邵磊肖志忠吴伟民李军; 关键词：支持向量机冷冻保存 LIBSVM

Evaluation of the damage in fish spermatozoa cryopreservation被引量：5: 2006年; Cryodamages occur during sperm cryopreservation. Cryopreservation of fish sperm usually results in marked decrease in sperm quality, such as swelling or disruption of the plasma membrane, mi-tochondrial dysfunction, diminished sperm motility, impaired velocity, shorter motility period, denatura-tion, and release of some enzymes from spermatozoa. In this paper, damages in morphology, physiology, biochemistry and metabolism, and genetic integrity of fish semen after cryopreservation are discussed. New approaches in assessment of fish thawed sperm quality such as computer assisted sperm analysis, flow cytometic analysis combined with fluorescent probes and single cell gel electrophoresis are also briefly reviewed.; 李军刘清华张士璀; 关键词：冷冻损伤低温贮藏

LM神经网络在鱼类胚胎保存抗冻剂毒性试验设计中的应用被引量：2: 2007年; 采用LM算法神经网络对鱼类胚胎冷冻保存抗冻剂毒性试验数据进行了分析,研究了孵化率和抗冻剂种类、浓度以及平衡时间等因素之间的对应关系,为鱼类胚胎冷冻保存的研究提供了新的分析手段,研究结果表明这一方法行之有效。; 邵磊肖志忠; 关键词：神经网络 LM算法

大西洋牙鲆冷冻精子×褐牙鲆卵杂交胚胎的发育及胚后发育被引量：12: 2006年; 利用大西洋牙鲆冷冻精子与褐牙鲆卵授精，培育出了生长健康的杂交鱼苗。并对杂交后代的胚胎发育、胚后发育和不同温度下的生长特征进行了研究。利用OLIMPUS显微镜连续观察和描述了冷冻精子受精杂交胚胎的发育，在水温15～17．1℃，其受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、胚孔封闭、肌节胚、尾芽胚、心跳胚、出膜胚等时期的发育，经历65h57min完成胚胎发育进入胚后发育，发现胚胎搐动15min后心脏开始跳动。利用OLIMPUS解剖镜每天观察和记录一次鱼苗的生长形态，并测定其体全长；将杂交鱼苗的胚后发育划分为卵黄囊吸收期（出膜后1-6d）、变态前期（出膜后7～25d）、变态期（出膜后25～30d）和变态后生长期（出膜30d以后）4个时期。对16～17℃、18～19℃、20℃和22～23℃4个温度环境下胚胎发育的研究结果显示，杂交胚胎宜于在16～20℃的水温下发育，鱼苗在22～23℃孵化出膜后2～3d大量死亡。对18—19℃、20℃、22℃和24℃4个温度下稚鱼的生长研究结果显示，变态期稚鱼在22—24℃水温下饲养时变态和生长速度较18-20℃快。; 田永胜陈松林刘本伟王波; 关键词：褐牙鲆冷冻精子胚胎发育胚后发育

不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用被引量：9: 2007年; 以牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同发育期胚胎为实验材料,研究了7种渗透性和5种非渗透性抗冻剂对牙鲆尾芽期和心跳期胚胎的毒性,同时对玻璃化液在不同胚胎发育期的毒性作用,以及玻璃化颗粒冷冻过程中,冷冻颗粒降温和解冻的时间进行了研究。结果表明,单一渗透性抗冻剂对牙鲆胚胎的毒性随着抗冻剂浓度的升高、平衡时间的延长而提高,其毒性由大到小依次为乙二醇(EG)、酒精(EtOH)、甘油(Gly)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2-丙二醇(PG)。非渗透性抗冻剂中聚乙烯吡咯酮(PVP)对牙鲆尾芽期胚胎的毒性最强,其次是蔗糖和D果糖,葡聚糖和葡萄糖毒性最弱。在总体积分数一定的情况下,PG、MeOH与DMSO体积比为9∶6∶5的混合抗冻剂对牙鲆尾芽期胚胎毒性最低;各发育期胚胎经过玻璃化液平衡后,尾芽期以前胚胎的成活率随胚胎发育期逐渐升高,心跳期以后逐渐降低,尾芽期和心跳期成活率最高。含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温时间最短为15.09 s,解冻时间最短为6.22 s;而不含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温和解冻时间分别为(13.83±1.86)s和(7.20±0.90)s。将PG、MeOH与DMSO按体积比9∶6∶5配成总体积分数为35%的混合溶液,再添加5%的蔗糖配制成玻璃化液,采用此玻璃化颗粒冷冻方法对173粒牙鲆尾芽期至心跳期胚胎进行超低温冷冻保存,解冻后共获得4粒成活胚胎。; 刘本伟陈松林田永胜孔晓瑜王春花; 关键词：抗冻剂玻璃化

利用显微注射技术冷冻保存牙鲆胚胎被引量：2: 2008年; 在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用。本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆（Paralichthys olivaceus）胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存。研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为：乙二醇（EG）、甘油（Gly）、二甲基亚砜（DMSO）、甲醇（MeOH）、1,2丙二醇（PG）、PM21（PG∶MeOH=2∶1）;对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选。实验结果显示,注射600pL（1pL=10-6mL）抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎（P〈0.05）,成活率为（64.04±2.05）%;对卵黄囊、卵膜与卵黄膜间隙作为注射部位进行了选择,发现采用卵黄囊内注射的胚胎成活率高于＂五步平衡法＂,并显著高于通过卵黄膜间隙注射（P〈0.05）,其成活率为（44.24±7.88）%。结果表明,注射600pL35%PM21至牙鲆心跳期胚胎卵黄囊内,平衡10min,然后进行玻璃化冷冻保存,取得了68.2%~79.4%透明胚胎,能够对牙鲆胚胎提供很好的保护。说明显微注射方法可以成功地将抗冻剂注射入牙鲆胚胎,并在牙鲆胚胎的冷冻及胚胎的完整性方面发挥有效的保护作用。; 丁浩田永胜武鹏飞刘洋陈松林; 关键词：牙鲆胚胎显微注射玻璃化冷冻保存

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国家高技术研究发展计划(2003AA603510)

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