福建省科技厅重大项目(2005Q007)
- 作品数：8 被引量：55H指数：5
- 相关作者：黄建忠田宝玉柯崇榕杨欣伟江贤章更多>>
- 相关机构：福建师范大学更多>>
- 发文基金：福建省科技厅重大项目福建省发展和改革委员会项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 果胶酶高产菌株EIM－6的筛选鉴定及其液体发酵产酶条件优化被引量：17
- 2009年
- 通过筛选得到一株适合液体深层发酵培养的高产果胶酶菌株EIM-6,基于形态学与ITS序列分子系统进化分析,鉴定为Aspergillus niger.运用单因子实验确定EIM-6产果胶酶最适碳源和氮源.在此基础上,通过Plackett-Burrman设计对影响其产酶的相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的3个因素.然后通过最陡爬坡实验在上升最高点处由中心组合实验和响应面分析确定其最适产酶条件.实验优化的最优产酶条件为:w(橘皮粉)4.09%,w(麸皮)3.16%,w((NH4)2SO4)0.35%,w(K2HPO4)0.3%,w(CaCO3)0.24%,初始pH 6,接种量107/mL,转速250 r/min,28℃培养80 h酶活达30 231 U/mL,与初始相比,酶活提高2.07倍.
- 杨欣伟林伟铃田宝玉柯崇榕黄薇黄建忠
- 关键词：果胶酶响应面分析法
- 酿酒酵母adh2和ald6双基因缺失突变株的构建被引量：7
- 2009年
- 酿酒酵母乙醇合成代谢过程中,阻断或削弱乙醛至乙酸代谢流不但能增强乙醇合成流,同时还能降低发酵乙酸含量。本研究以乙醇脱氢酶Ⅱ(adh2)基因缺陷型酿酒酵母YS2-Δadh2为出发菌株,应用长侧翼同源两步PCR(LFH-PCR)策略构建乙醛脱氢酶Ⅵ(ald6)基因敲除组件,转化酿酒酵母YS2-Δadh2敲除ald6基因,之后转入表达质粒pSH65到阳性克隆中,半乳糖诱导表达Cre重组酶切除Kanr基因筛选标记,最后,传代丢失质粒pSH65获得单倍体ald6基因缺失突变株。利用同样的敲除组件和技术再次敲除其等位基因,最终获得双基因缺失突变株YS2-△adh2-Δald6。发酵实验表明与出发菌株YS2相比,突变株乙酸合成量降低18%,乙醇最高产量提高12.5%。
- 王艳尊雷娟娟江贤章高媛媛李欣蓝灿华陈由强陈如凯黄建忠
- 关键词：酿酒酵母基因敲除
- 长梗木霉内切葡聚糖酶I基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：9
- 2009年
- 一株纤维素酶高产菌株经ITS序列鉴定并命名为长梗木霉SSL(Trichoderma longi-brachiatum,SSL)。利用RT-PCR的方法从该菌株中克隆出内切-1-4-β-D-葡聚糖酶I的基因(eg1),该基因全长1386bp,编码461个氨基酸。序列分析表明:该基因序列与T.longibrachiatum egl1基因具有90%以上的同源性。将该基因的成熟肽编码序列插入到Pichia pastoris表达载体pPIC9k中,构建重组表达质粒pPIC9k-eg1,转化P.pastoris GS115。重组P.pastoris菌株,经甲醇诱导后,胞外重组内切葡聚糖酶I的活力达73U/mL。SDS-PAGE中出现一条明显加强的蛋白质条带,其分子量大约为58kD。
- 刘海英王娟舒正玉吴松刚黄建忠
- 关键词：分子标记毕赤酵母
- 表达淀粉酶、糖化酶葡糖酸醋杆菌工程菌的构建
- 2011年
- 采用基因融合技术,将葡糖酸醋杆菌Gluconacetobacter hansenii ATCC23769分泌蛋白CMCax的信号肽序列分别与来源于枯草芽胞杆菌的淀粉酶基因、黑曲霉的糖化酶基因融合构建融合蛋白,连入能在G.hansenii ATCC23769自主复制的载体pbs-H1S中,电击转入G.hansenii ATCC23769,构建能内源表达淀粉酶、糖化酶,以及淀粉酶-糖化酶的葡糖酸醋杆菌。淀粉平板透明圈检测结果和DNS测酶活结果显示,构建的3种工程菌能成功表达并分泌淀粉酶和糖化酶。
- 潘凌鸿李欣颜彩玲黄建忠
- 关键词：细菌纤维素淀粉酶糖化酶
- 碱性蛋白酶高产菌株EIM-8的筛选鉴定及其液体发酵条件优化
- 2011年
- 筛选分离得到一株高产碱性蛋白酶菌株EIM-8,并基于16S序列进行分子系统进化分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。同时,采用响应面法对Bacillus subtilis EIM-8的产酶条件进行了优化。首先通过单因素试验,筛选出最适碳源为玉米淀粉,最适氮源为牛肉膏。在此基础上,采用Plackett-Burman试验设计筛选出影响酶活的三个主效因子——玉米淀粉、装液量和初始pH值。再通过最陡爬坡实验逼近最大响应区域,用Box-Behnken试验设计和嵴岭分析确定主效因子的最优水平。优化后酶活可达10232.2 U/mL,较优化前提高了2.53倍。
- 秦勇柯崇榕
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶响应面法
- 福州森林红壤细菌的菌群结构及其功能分析被引量：7
- 2009年
- 福建地区是我国的第二大林区,土壤类型主要表现为红壤。对福州地区森林中因木材腐朽而形成的树洞中的土壤样品进行筛选,构建了一份具有强木质纤维素降解能力的酸性红壤的细菌16S rRNA基因文库,利用限制性片段长度多态性(RFLP)对随机克隆进行筛选;对该生态环境下的细菌菌群进行了系统发育分析。结果表明土壤pH偏酸性严重影响了细菌类群的多样性,酸杆菌门Acidobacteria(71.5%)和变形菌门Proteobacteria(24.1%)是该酸性土样中的优势菌群,其中酸杆菌门在该生态系统中占有绝对优势。变形菌菌群中的主要类群为光合细菌,固氮细菌和溶菌细菌。研究表明,在木质纤维素自然降解的过程中,存在于酸性树洞土壤中的细菌参与了碳素和氮素的固定与循环,并对其微生态的稳定起到重要作用。
- 黄钦耿田宝玉江贤章柯崇榕徐燕杨欣伟黄建忠
- 关键词：RFLP分析生态功能
- 破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定被引量：5
- 2008年
- 应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.
- 江贤章陈金卿田宝玉高媛媛舒正玉李欣蓝灿华黄建忠
- 关键词：破囊壶菌启动子绿色荧光蛋白
- 果胶酶高产菌株EIM-4的鉴定及其液体发酵条件优化被引量：12
- 2008年
- 目的:通过了解高产果胶酶菌株EIM-4的背景信息及优化其最适的产酶条件,为下一步工业化生产提供依据。方法:通过基于18S rDNA序列的系统发育进化分析对果胶酶高产菌进行鉴定,通过单因素试验和均匀设计获得最适产酶条件。结果:通过对18SrRNA基因的分子系统进化分析,菌株EIM-4被鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。通过单因素和均匀设计试验确定最佳产酶培养基为(g/L):橘皮粉32.9,黄豆粉10.7,(NH4)SO42.1,CaCO31.0,pH自然。结论:Aspergillus niger EIM-4的液体发酵产果胶酶的活力可达15159.82U/mL。
- 柯崇榕田宝玉杨欣伟林伟铃黄薇黄建忠
- 关键词：果胶酶黑曲霉分子系统进化液体发酵均匀设计
