教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-05-0857)
- 作品数：14 被引量：67H指数：6
- 相关作者：罗军韩雪峰武会娟余刚刘俊霞更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学石河子大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 西农萨能山羊锌指蛋白基因Ubi-d4的筛选、克隆和生物信息学分析被引量：1
- 2008年
- 【目的】克隆西农萨能山羊泌乳中期和后期乳腺组织差异表达基因Ubi-d4并进行生物信息学分析,为进一步研究该基因的功能以及乳腺退化的分子机制提供信息。【方法】以西农萨能羊乳腺组织为材料,利用抑制性消减杂交技术筛选泌乳中期和后期乳腺组织差异表达基因,用RT-PCR克隆Ubi-d4基因,用实时定量PCR分析Ubi-d4基因的表达水平变化,用生物信息学方法对Ubi-d4基因进行结构和功能域预测。【结果】山羊乳腺Ubi-d4基因开放读码框全长1176bp,编码391个氨基酸,GenBank登陆号为EF105410;与牛(XM_881516)、人(NM_006268.3)、鼠(NM_011262)、兔(XM_341998)对应基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为98%、90%、93%、90%和99%、99%、99%、98%,泌乳后期乳腺组织中mRNA表达水平是泌乳中期的6.10倍;氨基酸序列中含有一个C2H2型锌指结构,一个PHD型锌指结构,没有信号肽和跨摸结构。【结论】筛选到西农萨能山羊乳腺泌乳后期高水平表达基因Ubi-d4,克隆了它的开放读码框(1176bp,GenBank No:EF105410);生物信息学分析推测它是乳腺退化过程中的重要功能基因。
- 武会娟罗军张丽娟杨宝进韩雪峰王海滨
- 关键词：萨能山羊乳腺组织抑制性消减杂交
- 不同泌乳期奶山羊乳腺OPN基因表达及其对MCF-7细胞生长的影响被引量：6
- 2009年
- 为了研究骨桥蛋白基因(OPN)在奶山羊(Capra hircus)乳腺组织不同泌乳期的变化规律及其功能,采用SYBR Green染料建立该基因的实时荧光定量PCR(QPCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对该基因在乳腺组织泌乳28d、60d、100d、190d、270d和330d的mRNA表达水平进行检测;同时将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA3.1-OPN,所获重组质粒经过酶切和测序鉴定后,转染MCF-7细胞,采用MTT(四唑盐,3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromid)法检测OPN对MCF-7细胞的增殖差异,结果表明:OPN基因在泌乳初期(28d)和泌乳后期(190d)表达水平较高,干奶期最低,其表达水平总体呈现高-低-高-低的变化模式。MTT实验表明转染OPN基因的MCF-7细胞较未转染基因组细胞的生长具有显著差异(P<0.05),说明OPN的表达具有促进MCF-7细胞生长的作用。
- 孙杰罗军刘俊霞李大全
- 关键词：奶山羊乳腺组织荧光定量PCR细胞生长
- 体外培养奶山羊乳腺上皮细胞的形态学观察被引量：9
- 2008年
- 采用胶原酶和透明质酸酶组合消化法分离培养奶山羊乳腺上皮原代细胞,并通过胰蛋白酶和EDTA选择性消化法纯化奶山羊乳腺上皮细胞,建立了奶山羊乳腺上皮细胞系。显微镜下观察,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;角蛋白免疫组化染色后,呈现阳性反应。
- 曹艳红罗军张蒙赵晓娥郑惠玲
- 关键词：乳腺上皮细胞细胞培养奶山羊
- 陕北白绒山羊H-FABP基因多态性及其与部分生产性能的相关研究被引量：3
- 2007年
- [目的]探讨陕北白绒山羊群体的遗传特性,为陕北白绒山羊的选育提高和分子标记辅助选择等提供理论和试验依据。[方法]利用PCR-SSCP技术分析253只陕北白绒山羊H-FABP基因多态性及其与生长和胴体性状的关系。[结果]结果表明:该座位存在两个突变位点(G→A和T→C),且该群体处于Hardy-Weinberg非平衡状态;H-FABP基因的AA型和CC型个体的周岁重差异在0.05水平显著,AA型和BB型个体的体斜长差异达0.05显著水平,其AA型与BB型、CC型个体的眼肌面积差异均在0.05水平显著,其他性状在不同基因型间均不存在差异;此外,断奶重、周岁重、胸围和眼肌面积4项指标均表现为AA>BB>CC,出生重表现为AA>CC>BB。[结论]H-FABP基因可作为陕北白绒山羊生长及胴体性状的候选基因和绒山羊肉用性能的分子标记。
- 余刚罗军薛瑞权松安王伟周占琴绳贺军王荣
- 关键词：陕北白绒山羊PCR-SSCPH-FABP基因多态性
- 奶山羊乳腺正反消减文库的构建及序列分析
- ＜正＞引言在奶山羊一个泌乳周期的不同阶段,产奶量的高低与乳成分的变化存在很大的差异。目前,人们逐渐认识到导致这些差异产生的原因,是由乳腺组织中诸多相关功能基因时空表达决定的,但其中的调控机理尚不
- 孙杰罗军武会娟刘俊霞李大全
- 关键词：奶山羊乳腺
- 文献传递
- 西农萨能羊乳腺脂肪酸合酶基因exon 9-15的克隆与序列分析被引量：7
- 2008年
- 【目的】山羊FAS基因exon 9-15编码的乙酰/丙二酸单酰基转移酶(acetyl-CoA and malonyl-CoA transacylases,AT/MT)区域对山羊乳短、中链脂肪酸的合成起重要调控作用。本研究针对西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15进行克隆和序列分析。【方法】以处于泌乳期28d的西农萨能羊乳腺组织mRNA反转录的cDNA为模板,通过RT-PCR方法首次扩增出西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15的cDNA序列全长及exon 8的3′端和exon 16的5′端部分cDNA序列(GenBank收录号为DQ915966),并对其进行了同源性分析和功能预测。【结果】克隆片段全长1449bp,其中包括exon 9-15共1388bp、exon 8的3′端9bp和exon 16的5′端52bp,编码483个氨基酸,包含编码的AT/MT区域951bp(454～1404nt);西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15与牛(NM_001012669),人(NM_004104),大鼠(NM_017332)和鸡(NM_205155)核苷酸序列相似度分别为95%、85.7%、82.7%、73.2%,氨基酸相似度分别为92.9%、77.7%、82.3%、64.7%;exon 10较其它物种缺失1个氨基酸。【结论】克隆获得西农萨能羊FAS基因片段全长1449bp,外显子9-15大小分别为463、185、190、95、135、204和116bp;核苷酸及氨基酸序列与牛相应序列的同源性均高于其它物种;AT/MT区域的活性位点在各物种间均为高度保守的丝氨酸,但西农萨能羊exon 10较其它物种缺失1个氨基酸,这可能对AT/MT区域的空间构象及其生理功能产生重要影响。本研究为西农萨能羊FAS基因cDNA全长克隆以及基因功能研究奠定了重要基础。
- 王海滨罗军武会娟韩雪峰单翠燕张宁
- 关键词：山羊乳腺组织EXON
- 陕北白绒山羊HSL基因外显子1的SNPs及其与部分生产性状的相关分析被引量：7
- 2009年
- 【目的】探讨陕北白绒山羊激素敏感脂酶(Hormone sensitive lipase,HSL)基因外显子1的SNP遗传多态性及其与产绒、胴体和生长性状的相关关系,为陕北白绒山羊分子标记辅助选择提供理论依据。【方法】测定168只陕北白绒山羊部分生长、胴体指标。利用PCR-SSCP技术分析HSL基因外显子1的SNP遗传多态性。【结果】陕北白绒山羊HSL基因外显子1有AB和AA 2种基因型,在群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态;AB与AA基因型个体的绒长差异极显著(P<0.01),体高和背膘厚差异显著(P<0.05),其他性状均无显著差异;AB基因型个体初生重、断奶重、绒长、周岁重、体高、体长、管围、背膘厚大于AA基因型,但AA基因型个体毛长、产绒量、胸围、眼肌面积大于AB基因型。【结论】陕北白绒山羊HSL基因外显子1具有多态性,该基因可能是陕北白绒山羊产绒及胴体性状的主效基因,或者与控制这些性状的主效基因相连锁。
- 刘俊霞罗军滕炎玲绳贺军林先滋余刚
- 关键词：陕北白绒山羊PCR-SSCP单核苷酸多态性
- 西农萨能羊两个泌乳阶段差异表达基因SAA3的克隆和序列分析
- 2007年
- 为了研究不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因,利用抑制性削减杂交技术构建西农萨能羊泌乳60 d乳腺组织及泌乳28 d乳腺组织中差异表达基因文库,用Real-Time PCR技术验证阳性克隆血清淀粉样蛋白A 3(SAA3)基因,通过RT-PCR方法克隆西农萨能羊乳腺组织SAA3,并进行序列比对和功能预测。结果成功构建了西农萨能羊不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因文库,筛选克隆了乳腺组织SAA3基因,GenBank登录号为:DQ839400,编码区长度为396 bp,含有131个氨基酸。西农萨能羊乳腺组织中SAA3与牛(GenBank:NM_181016)、兔(GenBank:M64696.1)、人(GenBank:BC020795)、鼠(GenBank:NM_011315)核苷酸同源性分别为95%、84.3%、81.3%和81.9%,氨基酸同源性为93%、76%、72%、72%;在编码区261-287位较人、兔、鼠SAA编码区多27个碱基,连续大于5个氨基酸的保守区域有6个,较人SAA多3个潜在功能基序。
- 武会娟罗军张丽娟韩雪峰杨宝进王海滨单翠燕张宁余刚
- 关键词：乳腺组织
- 陕北白绒山羊DGAT1基因外显子14多态性及其与部分生长和胴体性状的关系被引量：10
- 2008年
- 【目的】探讨陕北白绒山羊DGAT1基因的SNPs及其与部分生长、胴体性状的相关性,为陕北白绒山羊分子标记辅助选择提供理论依据。【方法】测定234只陕北白绒山羊的部分生长、胴体指标,利用PCR-SSCP技术分析其DGAT1基因外显子14的多态性及与生长和胴体性状的关系。【结果】该座位存在一个突变位点(G→A),此SNPs导致甘氨酸(G)突变为谷氨酸(E);该群体的该位点有1对等位基因A和B以及3种基因型AA、AB和BB,A基因为优势等位基因,AA型为优势基因型,群体处于Hardy-Weinberg非平衡状态;AA型与BB型之间、AB型与BB型之间均在断奶重、周岁重、胸围和管围4个性状上差异极显著(P<0.01),但AA型与AB型之间在此4个性状上差异不显著(P>0.05);3种基因型间在其他性状上差异均不显著(P>0.05);在初生重、周岁重和胸围上均表现为BB型>AA型>AB型,在断奶重、体高和管围上均表现为BB型>AB型>AA型。【结论】该基因的此突变位点与绒山羊育种指标具有一定的相关性,通过提高BB型的频率可望改善绒山羊的生长发育及胴体性状;DGAT1基因可作为陕北白绒山羊生长及胴体性状的候选基因,也可作为绒山羊肉用性能的分子标记。
- 余刚罗军刘俊霞韩雪峰绳贺军张丽娟武会娟曹艳红
- 关键词：陕北白绒山羊PCR-SSCPDGAT1基因多态性
- 山羊与牛乳腺差异表达基因的筛选及半定量RT-PCR分析被引量：2
- 2007年
- 山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程,但在产乳量和乳成分(脂肪和蛋白含量)之间存在很大的差异,而且山羊奶还具有特殊的膻味。本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理,利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析。分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA,分离mRNA并合成cDNA,以山羊乳腺组织cDNA作为测试,牛的乳腺组织cDNA作为对照。cDNA经RsaⅠ酶切后将测试组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增。随机挑选克隆经PCR鉴定发现有150个克隆具有200bp-1000bp插入片段,挑选50个差异片段不等的克隆进行测序及同源性分析,结果得到5个已知乳蛋白(αs2酪蛋白、β酪蛋白、К酪蛋白、α乳清白蛋白和β乳球蛋白)基因的编码序列和6个新的EST序列,EST序列已登录GenBank,登录号分别为EG588067、EG588068、EG588069、EG588070、EG588071和EG588072。通过半定量RT-PCR分析,发现β酪蛋白基因mRNA表达量在山羊乳腺中显著高于其在牛乳腺中的表达量,К酪蛋白在乳腺中的mRNA含量与其所表达的蛋白质在乳中含量存在很大差异,表明К酪蛋白虽然和其他酪蛋白具有相同的调控机制,但其在分泌和运输机制上与其他酪蛋白不同。
- 张丽娟罗军武会娟刘俊霞绳贺军韩雪峰张宁余刚王海滨
- 关键词：乳腺差异表达基因SSH半定量分析
