国家自然科学基金(31200514)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 相关作者：邓治李德军刘辉夏志辉姜达更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学三峡大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省自然科学基金中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 巴西橡胶树一个AP2/EREBP转录因子的克隆及表达分析被引量：6
- 2013年
- 本文采用RACE技术从巴西橡胶树中鉴定出一个AP2/EREBP转录因子。该转录因子全长cDNA为1 225 bp,最长开放阅读框699 bp,预测编码蛋白包含232个氨基酸;序列比对分析发现,该转录因子具有一段保守的AP2/EREBP结构域,与拟南芥Soloist(At4g13040)类蛋白具有较高的相似性,将该基因命名为HbSoloist。半定量RT-PCR分析结果表明,HbSoloist在巴西橡胶树的胶乳、叶片、树皮和花中均有表达。与健康橡胶树相比,死皮树胶乳中HbSoloist表达量明显下降。研究发现HbSoloist表达受乙烯利、茉莉酸和低温处理调控,表明HbSoloist基因可能在巴西橡胶树乙烯、茉莉酸和低温反应中发挥作用。
- 杜磊张德春邓治刘向红李德军
- 关键词：巴西橡胶树转录因子基因克隆
- 橡胶树胞质型谷胱甘肽还原酶基因的克隆与表达分析被引量：4
- 2014年
- 根据橡胶树GR1基因(Hb GR1)部分序列设计特异引物,运用RACE和RT-PCR技术克隆Hb GR1全长c DNA序列;运用DNAMAN、MEGA 6.06、Prot Param及Signal P 4.1 Server等生物信息学软件对Hb GR1序列、GR1系统进化关系及Hb GR1的基本理化性质和亚细胞定位等进行分析;利用实时荧光定量PCR技术研究Hb GR1的表达模式;构建原核表达载体p EASYE1-Hb GR1,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白原核表达。获得2 082 bp的Hb GR1全长c DNA,其中5′非编码区293 bp,3′非编码区298 bp,开放阅读框长1 491 bp,共编码496个氨基酸,其编码的蛋白分子质量约为53.68 k Da,理论等电点p I为6.18。序列分析发现Hb GR1无信号肽,在氨基酸水平上与其他植物GR1具有很高的同源性,包含植物GR典型的NADH结合结构域、二聚体结构域和高度保守的GGTCV[I/L]RGCVPKK[I/L]LVY基序。对植物GR进行系统进化分析表明,Hb GR1属于双子叶植物GR分枝,与同属大戟科的蓖麻亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明Hb GR1在橡胶树胶乳、叶片、树皮和花中均表达;Hb GR1表达受死皮、乙烯、茉莉酸、过氧化氢和伤害调控。SDS-PAGE电泳结果表明重组质粒p EASY-E1-Hb GR1在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达一个分子量约为55 k Da的融合蛋白。
- 邓治刘辉王岳坤李德军
- 关键词：橡胶树氧化胁迫原核表达
- 橡胶树EST-SSR标记开发及特性研究(英文)被引量：1
- 2014年
- 为进一步开发橡胶树EST-SSR标记,该研究下载并组装了来自NCBI和马来西亚橡胶树EST数据库EST序列。在3 733个组装的橡胶树单一基因中共鉴定到566个潜在的SSR位点,平均3.96 kb会出现一个SSR位点。二核苷酸重复为最丰富的SSR重复类型,接下来是三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸重复。SSR位点重复单元数目最多的是5,接下来是12、6和7。在该研究中鉴定的51种类型SSR模体中,二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸重复分别有6、26、5、3和11种。GA/CT二核苷酸数目最多,接下来是TC/AG、AT/TA、CTT/GAA、TTC/AAG和TCT/AGA。在158个新开发的橡胶树EST-SSR标记中,99个可在橡胶树品种RRIM600中产生清晰扩增条带。该研究开发的EST-SSR标记丰富了橡胶树分子标记数量,必将在橡胶树DNA指纹图谱、遗传多样性、标记辅助选择、遗传图谱等方面得到广泛应用。
- 李德军邓治郭会娜夏志辉
- 关键词：橡胶树分子标记
- 巴西橡胶树sHSP23.8基因的克隆、生物信息学及表达分析被引量：5
- 2015年
- 本文采用RACE技术,从巴西橡胶树中克隆到一个小热激蛋白基因。该基因全长cDNA为1 002 bp,最长开放阅读框645 bp,预测编码蛋白包含214个氨基酸残基,与植物sHSP23.8蛋白具高度相似,将该基因命名为HbsHSP23.8。生物信息学分析显示,HbsHSP23.8具有α-晶体蛋白保守结构域,可能定位在叶绿体,HbsHSP23.8蛋白中预测到19个磷酸化位点。二级结构预测结果显示HbsHSP23.8由α螺旋、β转角、延伸链和随机卷曲组成。实时定量RT-PCR分析结果表明,HbsHSP23.8在巴西橡胶树胶乳、叶片、树皮、雄花、雌花、花药中均有表达。在橡胶树叶片不同发育时期,HbsHSP23.8表达存在明显变化。此外,HbsHSP23.8表达受高盐、干旱、低温、乙烯和茉莉酸处理调控,表明HbsHSP23.8可能在巴西橡胶树逆境胁迫应答、乙烯和茉莉酸信号途径中发挥作用。
- 李德军郭会娜邓治刘辉陈江淑姜达夏立琼夏志辉
- 关键词：巴西橡胶树基因克隆
- 橡胶树肌动蛋白解聚因子原核表达及纯化被引量：1
- 2014年
- 本研究根据HbADF序列设计引物扩增基因的编码区,并将其插入到原核表达载体pET28a上,成功构建重组质粒pET28a-HbADF。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌,经1 mmol/L IPTG诱导,获得相对分子量为20 ku的融合蛋白。表达蛋白以可溶和包涵体两种形式存在,通过亲和层析方法纯化可溶蛋白并获得HbADF融合蛋白,用抗HIS标签的单抗对纯化蛋白进行了Western blot鉴定。该结果为进一步研究HbADF蛋白特性及功能奠定基础。
- 邓治杜磊李德军
- 关键词：肌动蛋白解聚因子橡胶树原核表达蛋白纯化WESTERNBLOT
- 利用RAPD和ILP技术筛选橡胶树抗寒分子标记被引量：3
- 2014年
- 利用36个RAPD引物和7对ILP引物分别分析30份抗寒性差异的橡胶树种质DNA的多态性。结果显示7个RAPD引物扩增产物中出现9种多态性片段,回收并测序多态性片段,Blast比对结果表明其中6种片段为未知序列,其余3种片段HbR4PF、HbR6PF和HbR1+4PF分别与烟草冷胁迫cDNA文库差异表达基因、反转录转座子和橡胶树contig1323727序列同源。采用半定量RT-PCR分析HbR6PF表达模式,结果表明低温能调控HbR6PF基因的表达。在7对ILP引物中,只有抗坏血酸抗氧化物酶ILP引物扩增产物出现多态性条带,但该条带在抗寒和不抗寒种质中同时出现,说明该ILP标记不能用于区分抗寒和不抗寒种质。
- 邓治李德军
- 关键词：橡胶树抗寒性RAPDILP
- 巴西橡胶树TIM23-1基因克隆、进化及表达分析被引量：2
- 2015年
- 本研究采用RACE技术,从巴西橡胶树中鉴定出一个线粒体内膜转位因子TIM23基因。该基因全长c DNA为898 bp,最长开放阅读框567 bp,预测编码蛋白包含188个氨基酸;序列比对分析发现,该基因编码蛋白具有转膜区和PRAT结构域,与拟南芥TIM23-1蛋白具有较高的相似性,将该基因命名为Hb TIM23-1。实时定量RT-PCR分析结果表明,Hb TIM23-1在巴西橡胶树胶乳、叶片、树皮、雄花、雌花、花药中均有表达。在橡胶树叶片不同发育时期,Hb TIM23-1表达存在变化。与健康橡胶树相比,死皮橡胶树胶乳中Hb TIM23-1表达量明显下降。研究发现Hb TIM23-1表达受干旱和低温处理调控,表明HbTIM23-1可能在巴西橡胶树干旱和低温胁迫应答及死皮中发挥作用。
- 陈江淑邓治刘辉范玉龙姜达夏立琼夏志辉李德军
- 关键词：巴西橡胶树死皮基因克隆
