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三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及功能测定被引量：2: 2007年; 目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化,并对其功能进行测定。方法采用改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞,台盼蓝拒染实验观察细胞活力,利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞,倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化,定期收集培养细胞上清液,检测所培养肝细胞的分泌及生物转化功能,并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取(2～3)×108个肝细胞,存活率为(93±3)%;体外肝细胞培养第3天,细胞活力、清蛋白分泌功能恢复到最佳状态;三明治构型培养第7天,地西泮24h代谢量达到最高峰。三明治构型培养的肝细胞形成肝索样结构,并逐渐形成胆小管网络;在培养的21d内,清蛋白分泌、地西泮代谢始终维持较高的水平;肝细胞形态维持可达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能。三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究,而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。; 王莹张先杰宋茂民孙家邦段钟平陈煜乔欣; 关键词：肝细胞原代培养

乙醇对体外生长肝细胞功能的影响: 2005年; 目的探讨一种新的细胞培养模型以观察乙醇对培养肝细胞功能的影响。方法利用三明治构型培养成鼠肝细胞并观察酒精对其形态、胆汁分泌功能以及蛋白合成功能的影响。结果首先荧光二乙酯的肝细胞代谢显示,三明治构型肝细胞培养96 h后有明显的胆汁分泌功能,而在酒精干预后,胆汁分泌功能消失。其次三明治构型肝细胞96 h后具有较好的蛋白合成功能,而给予酒精干预后,肝细胞蛋白合成功能受到损害而明显下降。结论酒精可造成肝细胞损伤,导致肝细胞功能严重下降。本实验为在细胞水平研究酒精性肝病的发病机理提供了一个体外模型,具有重要的临床意义。; 张先杰孙家邦宋茂民袁辉生陈煜段钟平; 关键词：肝细胞酒精

酒精对体外肝细胞极性的影响被引量：2: 2005年; 目的观察酒精对培养肝细胞极性的影响。方法利用三明治构型培养成鼠肝细胞并观察酒精干预下其形态、膜区域蛋白特异性分布以及P450-b和白蛋白mRNA表达的变化,以确定酒精对肝细胞极性的影响。结果酒精干预后,肝细胞变扁平、多核、胞浆稀薄,肝板样结构消失;免疫组织化学染色证明肝细胞膜区域蛋白失去特异性分布;原位杂交显示加入酒精后只有较弱的P450-b和白蛋白mRNA阳性表达。结论酒精可导致肝细胞极性破坏,从而造成肝细胞损伤,本研究为在细胞水平研究酒精性肝病的发病机理提供了一个体外模型,具有较重要的临床意义。; 张先杰孙家邦宋茂民袁辉生段钟平卢实春; 关键词：肝细胞

体外肝细胞极性重建与cofilin的脱磷酸化被引量：5: 2007年; 目的证实体外肝细胞极性重建过程中存在cofilin的脱磷酸化。方法利用三明治构型培养成鼠肝细胞,应用western免疫印迹法分别检测细胞裂解物中cofilin、P-cofilin水平,以单层胶原培养肝细胞作为对照。结果三明治构型培养肝细胞获得了细胞极性重建,培养96h和1周组与对照组相比P-cofilin水平明显下降。结论体外肝细胞极性重建过程中存在cofilin的脱磷酸化。; 陈天宇张先杰孙家邦孙海晨李非; 关键词：细胞极性肝细胞丝切蛋白

三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及生物学特性的研究被引量：5: 2007年; 目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化，并对其功能进行测定。方法采用改良原位2步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞，台盼蓝拒染实验观察细胞活力，利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞，倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化，定期收集培养细胞上清液，检测培养肝细胞的分泌及合成功能，并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取2×10^8～3×10^8个肝细胞，活率在（93±3）％；体外肝细胞培养第3天，清蛋白分泌功能、尿素合成能力恢复到最佳状态。三明治构型培养的肝细胞清蛋白分泌功能、尿素合成能力在培养的14d内始终维持较高的水平，并形成肝索样结构，伴胆小管网络形成，肝细胞形态维持达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境，肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能，三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究，而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。; 王莹张先杰宋茂民孙家邦段钟平陈煜罗艳侠郭秀花; 关键词：肝细胞原代培养

缺氧对培养肝细胞极性的影响: 2005年; 目的观察缺氧对培养肝细胞极性的影响。方法利用三明治构型培养成鼠肝细胞,观察缺氧后肝细胞形态、特异性膜区域蛋白分布以及胞质钙离子的变化,以确定对细胞极性的影响。结果缺氧后,肝细胞变得扁平,分化良好的小管样结构消失;免疫组织化学证明肝细胞膜小管区域蛋白失去特异性分布;激光共聚焦显微镜显示肝细胞胞质钙离子荧光强度增强。结论缺氧可导致肝细胞极性丧失,从而造成肝细胞损伤,本研究可为在细胞水平研究肝脏缺血性再灌注损伤的发病机制提供一个体外模型。; 张先杰孙家邦宋茂民袁辉生段钟平; 关键词：肝细胞体外缺氧

胎牛血清在体外培养肝细胞极性形成的作用被引量：1: 2005年; 目的观察胎牛血清在体外培养肝细胞极性形成的作用。方法分别利用含胎牛血清和不含胎牛血清培养液培养成鼠肝细胞,并观察血清对肝细胞形态、特异性膜区域蛋白分布以及蛋白分泌的影响,以确定胎牛血清在体外肝细胞极性形成的作用。结果不含血清组,肝细胞形成肝板样结构,肝细胞膜区域蛋白特异性分布,肝细胞保持稳定的蛋白分泌并持续增长达2周之久。而含血清组肝细胞培养3d后,分化良好的小管样结构消失,肝细胞膜区域蛋白失去特异性分布,蛋白分泌逐渐减少。结论胎牛血清可阻止肝细胞极性的形成,对于肝细胞移植及生物人工肝支持具有重要意义。; 张先杰孙家邦宋茂民袁辉生陈煜段钟平; 关键词：肝细胞胎牛血清细胞极性养肝蛋白分泌鼠肝细胞

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北京市科技新星计划(2004B29)