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低浓度甲醛对多肽和蛋白化学修饰的质谱研究被引量：6: 2016年; 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱(Nano-ESI-QTOF MS)技术,以标准肽段和流感病毒基质蛋白酶切肽段为模型,研究了甲醛对蛋白质和多肽主链的修饰作用。采用与实际病毒灭活过程一致的实验条件(4℃,0.025%(V/V)福尔马林(37%(w/w)甲醛溶液)处理72 h),进行甲醛与多肽的化学反应。结果表明,在实验条件下,甲醛能与标准肽段N端的氨基反应生成羟甲基加合物,再发生缩合反应生成亚胺,形成+12 Da的产物。此外,甲醛还能与标准肽段中的精氨酸、赖氨酸的侧链发生反应,生成+12 Da的反应产物。对流感病毒基质蛋白的酶切肽段与甲醛的反应的质谱分析结果显示,多数的肽段都生成了+24 Da的产物,质量的增加来源于肽段N端氨基(+12 Da)和C端精氨酸或赖氨酸的侧链(+12 Da)的贡献。此外,还观察到有一个漏切位点的肽段生成了+36 Da的产物。本研究结果表明,在实验条件下,低浓度甲醛主要与肽段和蛋白的N端氨基,以及精氨酸和赖氨酸侧链发生反应。本研究为分析低浓度甲醛与蛋白质的反应产物提供了有效的质谱分析方法和解谱依据。; 王子健杨静波李光谱孙宁宁孙万春彭其胜刘宁; 关键词：甲醛多肽基质蛋白化学修饰质谱

质谱法分析大肠癌组织中踝蛋白的磷酸化修饰被引量：3: 2012年; 踝蛋白的磷酸化修饰,特别是肿瘤等病理条件下的踝蛋白磷酸化状态,与肿瘤的发病、转移机理密切相关。本研究采用盐析、离子交换层析和电泳分离并纯化了人大肠癌组织中的踝蛋白(Talin),经胰酶水解获得其肽段混合物,进一步分别利用固定化Fe3+亲和层析和TiO2亲和层析在酸性条件下对其中磷酸化修饰肽段进行吸附,并以1%氨水进行洗脱。在Michrom Magic C18色谱柱上,以A:99%水+1%乙腈+0.1%甲酸和B:99%乙腈+1%水+0.1%甲酸两种流动相进行梯度洗脱分离,采用ESI质谱进行依赖数据的二级子离子扫描。结果显示,固定化Fe3+富集到8个磷酸化肽段而TiO2富集到9个磷酸化肽段。本研究提供了一种快速、准确地鉴定从人大肠癌组织中分离表征踝蛋白的方法。; 孙莉赵海丰郭宏华扬光远何成彦师庆红文雪王小婷赵丽纯; 关键词：质谱大肠癌磷酸化修饰

利用生物正交反应研究流感病毒在宿主细胞中的动态过程: 生命活动是动态的,蛋白质作为生命活动中起重要作用的生物大分子,无时无刻不在通过各种代谢途径进行着自我更新。而任何外界的刺激信号也能够使机体细胞通过合成新的蛋白以快速适应环境的变化。我们利用生物正交反应,在细胞基因翻译过程...; 孙宁宁高祥王子健程欣刘宁; 关键词：点击化学流感病毒质谱; 文献传递

禽流感病毒H5N1病毒颗粒中鸡胚宿主蛋白的质谱分析被引量：3: 2012年; 在A型流感病毒等许多包膜病毒的病毒颗粒中,除包含病毒基因组编码的结构蛋白外,还包含来源于宿主细胞的多种蛋白。然而,在鸡胚内增殖的病毒颗粒所包含的宿主蛋白的种类尚不清楚。本研究采用20%～60%(w/w)蔗糖密度梯度离心法分离纯化了繁殖于鸡胚的流感病毒,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结合质谱法对纯化的流感病毒颗粒进行了全面的蛋白质组学分析。结果表明,在病毒颗粒中,除包含9种病毒编码蛋白外,还发现了12种来源于鸡胚的蛋白,如膜联蛋白A2、肽酰脯氨酰顺反异构酶B、过氧化物酶1、磷酸甘油酸激酶、丙酮酸激酶肌组织异构酶等,以及2种细胞骨架蛋白(微管蛋白b-3和肌动蛋白)。; 王志武孙万春周悦丛中一周庆伟刘宁; 关键词：鸡胚流感病毒凝胶电泳质谱分析

流感病毒蛋白棕榈酰化修饰的研究进展被引量：1: 2016年; 脂类修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,流感病毒蛋白可发生不同类型的脂酰化修饰,其中棕榈酰化修饰是其脂类修饰的主要形式,棕榈酰化修饰对流感病毒蛋白的运输、疏水性、胞内定位等具有重要意义,同时在流感病毒装配、膜融合时发挥重要作用。目前,对蛋白棕榈酰化修饰的研究方法主要有放射性同位素标记法、酰基-生物素置换法(acyl-biotinyl exchange,ABE)、质谱检测法。本文对流感病毒蛋白棕榈酰化修饰的研究进展及其分析方法作一综述,为进一步了解流感病毒蛋白棕榈酰化的机制提供参考。; 高祥王子健孙宁宁刘宁; 关键词：流感病毒病毒蛋白

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国家自然科学基金(21175055)