国家海洋公益性行业科研专项(201105016-3)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 相关作者：常亚青丁君李成泽沙飞程龙更多>>
- 相关机构：大连海洋大学更多>>
- 发文基金：国家海洋公益性行业科研专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 刺参耐寒基因筛选cDNA文库的构建与分析被引量：1
- 2013年
- 利用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术,对刺参Apostichopus japonicus耐低温性状相关的基因进行研究。通过对刺参进行低温骤降试验,利用SSH技术构建刺参低温骤降双向消减cDNA文库,共获得6 800个阳性克隆,从文库中随机挑取1 000个阳性克隆测序,共获得680条有效EST序列。利用Blastx软件将测序结果与GenBank数据库进行比对,结果显示:72个克隆与已知基因高度同源,其中有6个基因与应激和免疫反应相关,存在于正向文库的有4个,分别为铁蛋白、溶菌酶、类似紫海胆冷诱导β-RNA结合蛋白和huadl3021索转铁蛋白,存在于反向文库的有2个,分别为热休克同源蛋白70和热休克蛋白gp96;有3个基因与营养代谢和运输相关,且都存在于反向文库,分别为主要卵黄蛋白1、主要卵黄蛋白2和胰淀粉酶。研究表明,刺参低温骤降文库的成功构建对阐述其耐低温分子机制有非常重要的意义,为刺参育种和生物学研究提供了新的资料。
- 李成泽王晓燕丁君常亚青
- 关键词：刺参抑制消减杂交
- 刺参温度相关基因在模拟不同海域冬春季水温条件下的表达研究
- 2015年
- 为探讨不同海域冬春季水温对刺参温度相关基因的表达影响,在实验室内模拟了俄罗斯沿海地区、大连沿海地区、福建沿海地区12月至翌年4月刺参Apostichopus japonicus生长的海水温度,并从已构建的刺参耐寒基因筛选cDNA文库和刺参高温胁迫正反消减cDNA文库中选取了7个差异基因:hsp70、gp96、UQCRFS1、ferritin、lysozyme、mtLSU、proeintl(2)efl,利用实时荧光定量PCR方法研究了这7个基因在3种海域冬春季模拟水温条件下的表达情况。结果表明:3个水温组刺参同一组织中hsp70基因的表达量变化不明显,但在不同组织中的表达量存在差异;模拟福建沿海地区冬春季水温组刺参各组织中gp96基因的表达量整体上均高于其他两个水温组,并且在模拟福建沿海地区冬春季水温组刺参呼吸树中的表达量显著高于该组肠和体壁(P<0.05);模拟俄罗斯沿海地区冬春季水温组刺参各组织中UQCRFS1基因的表达量均高于其他两个水温组;3个水温组刺参各组织中ferritin基因的表达模式及表达量均不相同;3个水温组刺参各组织中lysozyme和proeintl(2)efl两个基因的表达量均在呼吸树中达到最高,且显著高于肠和体壁(P<0.05);3个水温组刺参各组织中mt LSU基因的表达模式基本相同,其表达量均表现为体壁显著高于肠和呼吸树(P<0.05)。
- 白雪秋丁君曹学顺李成泽常亚青
- 关键词：刺参温度实时荧光定量PCR功能基因
- 两种降温模式的低温胁迫对刺参抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响被引量：13
- 2015年
- 为研究不同降温模式的低温胁迫对刺参Apostichopus japonicu两种抗氧化酶(CAT、SOD)活性及MDA含量的影响,以规格为(107.48±23.28)g的刺参为研究对象,采取缓降及骤降两种降温模式对其进行低温胁迫,比较不同时期刺参体腔液中CAT、SOD活力和MDA含量的变化情况。结果表明:缓降模式低温胁迫后,刺参体腔液中CAT及SOD活力较胁迫前略有所上升,而MDA含量显著上升(P<0.05),2周恢复期后,CAT活力上升到最高水平(29.745U/mL),SOD活力恢复到与低温胁迫前相当水平;骤降模式低温胁迫后,刺参体腔液中CAT活力较胁迫前显著上升(P<0.05),为31.165U/mL,SOD活力降低至最低值(0.401U/mL),MDA含量显著上升(P<0.05),2周恢复期后,CAT活力达到最高值,为35.154U/mL,SOD活力上升至与低温胁迫前相当水平;1周0℃低温处理后,经缓降模式低温胁迫后的刺参体腔液中CAT、SOD活力和MDA含量均低于对照组,经骤降模式低温胁迫后的CAT活力低于对照组,而SOD活力显著高于对照组(P<0.05),MDA含量低于同时期缓降组。研究表明,经过骤降模式低温胁迫后的刺参,其体腔液中两种抗氧化酶对低温的响应相对于缓降模式更为灵敏,能够更好地抵抗膜脂过氧化对机体的损伤,与未经低温胁迫的刺参相比,对低温环境表现出一定的适应性。本研究结果可为明确刺参在低温环境下的免疫防护机制提供理论依据,并为筛选刺参耐低温品系提供一定的参考价值。
- 沙飞常亚青丁君
- 关键词：刺参低温胁迫过氧化氢酶丙二醛
- 刺参主要卵黄蛋白MYP1、MYP2在不同幼体发育阶段、成体组织及温度胁迫条件下的相对定量表达被引量：2
- 2014年
- 为探讨温度胁迫对刺参基因表达的影响,从已构建的刺参耐寒基因筛选cDNA文库中选取差异基因主要卵黄蛋白(major yolk protein,MYP):MYP1和MYP2,利用实时荧光定量PCR研究了其在刺参胚胎发生和个体发育9个阶段(受精卵、囊胚期、原肠期、小耳状幼体、中耳幼体、大耳幼体、樽形幼体、五触手幼体和稚参)、成体7种组织(呼吸树、体腔液、肠、纵肌、体壁、雄性性腺和雌性性腺)、长时温度胁迫(20℃、4℃,30 d)和低温短时胁迫(7℃、4℃、1℃、-2℃,12 h)成体肠组织中的表达量。结果发现,MYP1和MYP2表达模式基本相同:(1)在胚胎发育阶段樽形幼体时期开始表达,随后的阶段持续表达,到稚参阶段表达量最高;(2)在7种组织中,肠中的表达量最高,在体腔液中基本不表达,其余组织中均有表达;(3)在长时(30 d)温度胁迫下,肠组织中MYP表达量由高到低依次为4℃、12℃、20℃,且在4℃的表达量为20℃的6倍左右;(4)在低温短时胁迫(1℃、-2℃,12 h)条件下,肠组织中MYP表达量受到显著抑制,约为常温条件下的一半。研究表明,MYP在刺参胚胎发育的樽形幼体阶段开始合成,成体合成部位主要为肠,水温过低会抑制其表达。
- 李成泽常亚青丁君高银雪程龙左然涛曹学顺
- 关键词：刺参幼体发育温度胁迫
