广东省科技计划工业攻关项目(2005B31201008)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：刘煜张雪林敬明刘胜军秦琨更多>>
- 相关机构：南方医科大学广东省人民医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 稳定表达GPI-CD80融合蛋白CHO细胞株的构建被引量：2
- 2007年
- 目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定型人CD80重组基因的真核细胞表达质粒pRM10/GPI-CD80转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),构建CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株。方法将pRM10/GPI-CD80用脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选出阳性细胞克隆。采用流式细胞术和免疫荧光染色检测CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株表达GPI-CD80蛋白的效率的变化。结果转染GPI-CD80基因的CHO细胞在G418筛选下出现阳性克隆,且经过传代后不同代数的克隆细胞表面表达GPI-CD80的阳性率差异无统计学意义。结论pRM10/GPI-CD80在CHO细胞中成功表达,表达稳定且效率较高。
- 刘煜张雪刘胜军林敬明
- 关键词：糖基化磷脂酰肌醇脂质体真核表达
- 人CD80基因转染U251瘤株细胞的实验研究
- 2007年
- 目的构建编码人CD80基因的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞株U251,并检测CD80基因在U251中的表达。方法PCR法扩增人类CD80基因的开放阅读框(ORF)全长,酶切法连接入真核表达载体pcDNA3.1,构建为重组质粒pcDNA3.1/CD80,双酶切及测序鉴定。利用脂质体法将pcDNA3.1/CD80转染U251细胞株,应用RT-PCR、流式细胞术、免疫细胞化学法、Western blotting等技术从细胞及分子水平检测人CD80分子在U251细胞表面的表达情况。结果重组质粒pcDNA3.1/CD80双酶切可切出约900 bp目的片段,测序结果和NCBI检索CD80序列吻合;RT-PCR检测到pcDNA3.1/CD80转染后的U251细胞中CD80mRNA表达:荧光显微镜下观察可见大量免疫荧光标记的绿色荧光细胞,检测转染效率约31.8%;Western blotting可检测到约60kD蛋白条带。结论本实验成功构建了pcDNA3.1/CD80真核表达载体,并实现了在神经胶质瘤细胞株U251中的表达,为后续研究CD80的表达对肿瘤细胞免疫原性的影响以及制备神经胶质瘤肿瘤疫苗提供了重要的实验材料。
- 张雪林敬明姜晓丹马宏伟秦琨郭爱林刘煜
- 关键词：CD80神经胶质瘤肿瘤疫苗
- GPI-CD80融合蛋白的抗肿瘤作用研究被引量：3
- 2007年
- 目的研究GPI-CD80融合蛋白对肿瘤生长的抑制作用及其机制。方法将纯化的GPI-CD80蛋白与HepG2细胞共培养后用丝裂霉素灭活,制成肿瘤疫苗。设单纯丝裂霉素灭活的HepG2细胞为对照疫苗。将两组疫苗与裸鼠脾淋巴细胞共培养,MTT法检测淋巴细胞增殖及细胞因子IL-2、IFN-γ量的变化;乳酸脱氢酶法检测CTL的活性变化;将两组疫苗接种于荷瘤裸鼠,测量裸鼠肿瘤体积的变化。结果脾淋巴细胞经肿瘤疫苗刺激后,OD值、IL-2、IFN-γ的量和CTL的活性均高于对照疫苗组,差异有统计学意义;实验组荷瘤裸鼠平均肿瘤体积小于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义。结论GPI-CD80融合蛋白能够抑制荷瘤裸鼠瘤体的生长速度,其机制可能与诱导T淋巴细胞增生、刺激细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌、增强CTL活性等有关。
- 刘煜刘胜军张雪林敬明
- 关键词：GPICD80肿瘤疫苗
