广东省自然科学基金(05001786)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- Norrin在氧诱导的视网膜病变中的时空表达及其意义被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨视网膜新生血管疾病动物模型-氧诱导的视网膜病变(OIR)小鼠视网膜中Norrin的时空表达变化及意义。方法:荧光素灌注铺片观察OIR小鼠视网膜血管分布和形态。RT-PCR检测对照组P7、P10、P12、P17小鼠和OIR P7、P8、P12、P12.5、P13、P14、P15、P17、P19小鼠视网膜中Norrin、VEGF mRNA的表达。免疫组化法检测Norrin蛋白在视网膜中的表达和分布位置。结果:OIR小鼠P12时在视网膜后极部形成无灌注区,P17时有大量新生血管形成。Norrin mRNA在正常小鼠视网膜中表达水平低且稳定。缺氧12 h后,Norrin mRNA有显著升高,缺氧1 d到达高峰,然后缓慢下降,其变化趋势与VEGF mRNA一致。Norrin蛋白在正常小鼠各时点免疫组化均未能检出,在OIR模型中P15见弱表达,P17-P19表达明显增强。主要分布在视网膜外层,以内外节层、外丛状层为主。结论:Norrin在mRNA和蛋白水平都在缺氧视网膜中明显升高,主要分布在视网膜外层。Norrin很可能参与新生血管的形成,并起着重要的调控作用。
- 丁小燕李涛谢素贞马红婕李斌唐仕波
- 关键词：基因血管内皮生长因子视网膜
- 氧诱导的视网膜病变小鼠模型建立方法的改良被引量：3
- 2006年
- 目的:建立简单、稳定、成模率高的氧诱导的视网膜病变小鼠模型。方法:用改良法(A组)和传统方法(B组)分别建立氧诱导的视网膜病变的C57BL/6小鼠模型,比较两组的母鼠死亡率、乳鼠成活率和成模率,视网膜冰冻切片GSL染色免疫组化观察两组的视网膜新生血管,荧光素灌注视网膜铺片检测视网膜无灌注区和新生血管的面积。结果:改良法(A组)与传统法(B组)相比较,乳鼠成活率未降低,且具有母鼠死亡率低,成模率高,动物消耗量少的特点。改良法制作的小鼠模型视网膜无灌注区和新生血管面积较传统法多而典型。结论:改良法操作简单,能构建出高效、稳定、典型的视网膜新生血管模型。该方法值得推广和借鉴。
- 丁小燕梁小玲谢素贞朱晓波唐仕波
- 关键词：动物模型小鼠
- Norrin基因对人视网膜微血管内皮细胞增殖和周期的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:体外培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs),并探讨Norrin基因高表达对HRCECs增殖和周期的影响。方法:体外分离、培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞,抗第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定细胞。利用脂质体lipofectamine 2000将AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染HRCECs,RT-PCR、免疫组化和Western blot-ting方法检测Norrin/myc的表达确定转染效率。采用MTT法测定转染后细胞的增殖能力,流式细胞术分析其细胞周期变化。结果:所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性。AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染后24 h,RT-PCR显示实验组Norrin表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。转染后48h免疫组化及Western blot-ting均显示实验组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTT法显示细胞增殖高于对照组,细胞周期检测示实验组G2期细胞高于阴性对照组,P<0.01。结论:脂质体能成功转染AP-3myc-hNorrin/pRK5进入HRCECs。Norrin高表达能促进HRCECs的增殖,并促进细胞DNA合成,提示Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。
- 丁小燕李涛谢素贞马红婕李斌唐仕波
- 关键词：基因视网膜血管细胞增殖细胞周期
