国家自然科学基金(81000036)
- 作品数:2 被引量:4H指数:1
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- SD大鼠超排及TALEN质粒显微注射构建基因敲除大鼠被引量:4
- 2013年
- 目的 应用TALEN技术构建基因敲除大鼠,并探讨SD大鼠超数排卵、显微注射浓度、胚胎移植方式对构建大鼠出生率、阳性率的影响.方法 将SD雌鼠超数排卵后,取受精卵显微注射由TALEN质粒体外转录成的mRNA,注射后存活的受精卵输卵管移植,观察大鼠的出生率,并测序判定出生大鼠的基因敲除阳性率.结果 4~5周和5~6周的雌鼠超数排卵见栓率[(74±9)%vs(77±6%)%]、取卵数量[(25±2)枚vs (23±2)枚]以及卵的受精率[(85±2)%vs(93±2)%]差异均无统计学意义(P>0.05);结扎公鼠和受体雌鼠在8~10周时见栓率最高[(23.02±5.26%)%],使用12周后见栓率明显下降[(11.66±2.40)%];单侧和双侧输卵管移植大鼠出生率差异无统计学意义(37.88% vs 36.49%),但单侧移植大鼠存活率高于双侧移植(37.88% vs 20.27%,P<0.05),且单细胞移植大鼠出生率显著高于双细胞移植.质粒注射浓度在20 ng/μl组大鼠基因敲除阳性率最高(7.5%).结论 应用TALEN技术成功构建基因敲除大鼠,显微注射质粒浓度20 ng/μl时大鼠出生率不受影响且基因敲除阳性率最高.
- 卞洲艳杨政徐蔓张洁钰张洁钰廖海含
- 关键词:SPRAGUE-DAWLEY大鼠TALEN显微注射
- SD大鼠胚胎体外培养及TALEN质粒内源活性检测的研究
- 2013年
- 目的建立Sprague-Dawley(SD)大鼠1-细胞胚胎体外培养体系,并用于TALEN质粒内源活性检测。方法超排4~6周龄雌鼠,取0.5dpc雌鼠受精卵。将构建的TALEN质粒体外转录为mRNA后显微注射于受精卵胞质中,将注射成功的受精卵培养于mR2ECM培养液中。巢式PCR扩增目的基因,送测序检测TALEN质粒的敲除效率。结果取出的1-细胞胚胎在mR2ECM培养液中最大程度能发育到8-细胞胚胎;培养液的pH值影响了胚胎的发育程度,过滤前pa值7.18±0.12的培养液,胚胎8细胞发育率较高。本研究送检三批显微注射后体外培养的胚胎,检测结果表明胚胎发育至4细胞以上时,mRNA已经能够充分表达和发挥敲除作用,TALEN质粒的敲除效率为(9.3±2.8)%。结论建立SD大鼠1-细胞胚胎体外培养的体系,且将其成功应用于TALEN质粒内源活性检测。
- 卞洲艳杨政徐蔓张洁钰张洁钰廖海含
- 关键词:SPRAGUE-DAWLEYTALEN显微注射