黑龙江省自然科学基金(ZJN-03-6)
- 作品数：7 被引量：49H指数：3
- 相关作者：李海英郭德栋马春泉张绍军于冰更多>>
- 相关机构：黑龙江大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划国家转基因植物研究与产业化专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 利用mRNA差异显示技术分离甜菜M_(14)品系特异表达基因的cDNA片段被引量：14
- 2007年
- 二倍体栽培甜菜与白花甜菜杂交、进一步回交而获得的单体附加系M14,其染色体组成中除了含有18条栽培甜菜染色体外,还附加有一条野生白花甜菜第9号染色体,该附加染色体通过母本的传递率为96.5%;单体附加系传递率如此高的原因是因为M14中有无融合生殖基因的存在。本实验采用mRNA差异展示技术对甜菜无融合生殖品系M14和正常有性生殖的二倍体栽培甜菜A2Y花蕾减数分裂时期的基因表达进行了差异分析。采用GT15A,GT15G,GT15C3种锚定引物,共筛选了20个随机引物,通过RT-PCR检测,获得了6个阳性差异表达的cDNA片段,应用NCBI的BLASTx软件对测序结果进行同源序列、相似序列检索,为进一步克隆无融合生殖基因提供侯选cDNA片段。
- 李海英马春泉于冰高传军张绍军张莹郭德栋
- 关键词：无融合生殖
- 用TRIzol试剂一步法提取甜菜花蕾中的总RNA被引量：26
- 2004年
- 在花期分别对无融合生殖甜菜M14品系和进行正常有性生殖的二倍体甜菜A2Y品系的花蕾进行取样,采用TRIzol试剂一步法,分别提取了它们的总RNA,并测定了总RNA的浓度及纯度。讨论去除RNA酶的方法、具体操作的注意事项和TRIzol试剂一步法与其它方法相比的优越性。该方法为进一步进行mRNA差异显示分析和抑制消减杂交研究提供了总RNA的来源,也为今后能在甜菜中寻找和克隆与无融合生殖相关的基因提供了可靠的保证。
- 于冰李海英张绍军马春泉郭德栋王桂芝
- 关键词：甜菜无融合生殖总RNA
- 甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建被引量：3
- 2004年
- 为了克隆甜菜单体附加系M14无融合生殖相关基因 ,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果 ,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA ,分离纯化mRNA ,以Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶的作用下 ,合成第一链cDNA ,进而合成第二链cDNA。含有EcoRⅠ和NotⅠ粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连 ,并对连接产物进行体外包装 ,得到噬菌体颗粒 ,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库。经大肠杆菌寄主菌株XL1-blueMRF’平板检测 ,三个文库滴度分别为 2 .8× 10 5pfu·mL-1、1.6× 10 5pfu·mL-1和 3.5× 10 5pfu·mL-1,克隆重组率为 83%、78%和 81%。
- 郑天然李荣田孙晓凌李海英郭德栋
- 关键词：甜菜无融合生殖单体附加系CDNA文库
- 甜菜M14品系特异表达基因ESTs的生物信息学分析被引量：3
- 2007年
- 甜菜M14品系具有无融合生殖特性,为了获得M14品系特异表达的基因,本实验室前期利用抑制消减杂交(SSH)和mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术对M14品系和能够进行有性生殖的栽培甜菜A2Y品系进行了基因特异表达研究,获得了298条M14品系特异表达基因的ES-Ts。对这些ESTs进行生物信息学分析并进行了GO分类,筛选出5条可能与基因表达调控和细胞周期调控相关的ESTs,为进一步获得这些基因的全长序列并研究其功能奠定了基础,也为今后能在甜菜M14品系中寻找并克隆与无融合生殖相关的基因提供了可靠的保证。
- 梅其文胡伟明吴烨东李海英
- 关键词：甜菜M14品系生物信息学分析
- AFLP指纹图谱试验体系在甜菜无融合生殖系中的应用被引量：1
- 2004年
- 目的 :比较甜菜无融合生殖品系M1 4子代之间的同一性及亲缘关系 ,从而验证AFLP试验体系在甜菜无融合生殖系中的适用性。方法 :利用已建立的AFLP试验体系 ,通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测以及遗传距离的比较来验证这一试验体系。结果 :M1 4子代之间及二倍体甜菜之间的同一性较好 ,其亲缘关系也较近。结论 :验证了所建立的AFLP试验体系的适用性 ,同时也确证了AFLP技术在构建DNA指纹图谱中的优越性 。
- 马春泉李海英张绍军郭德栋王桂芝
- 关键词：甜菜无融合生殖AFLP同一性
- 拟南芥FIE基因特异片段的克隆及序列测定被引量：1
- 2004年
- 根据拟南芥FIE基因的序列设计PCR引物,以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR反应扩增FIE基因特异性片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长为1633bp,与预期结果相符。将该基因片段定向克隆到pGEM-T载体上,得到重组质粒p1633,酶切鉴定及测序分析结果表明该克隆为拟南芥FIE基因特异片段,与拟南芥FIE基因比较同源性达99.8％,可以作为探针使用。
- 郑天然李荣田李海英刘丽萍郭德栋
- 关键词：拟南芥PCR同源性
- 甜菜M14品系花期cDNA文库的构建及特异表达基因的筛选被引量：5
- 2008年
- 构建了甜菜M14品系在花期的ZAP表达载体的cDNA文库,利用抑制消减杂交方法所获得的M14品系特异表达的2个EST片段为探针筛选cDNA文库,获得了M14品系特异表达cDNA片段Me-86和Me-84;进一步利用RACE技术获得了基因M14-86 cDNA片段的全长序列。生物信息学分析表明M14品系特异表达基因M14-86的cDNA片段与cDNA片段Me-84分别与大花马齿苋(Portulaca grandiflora)及瓶子草(Sarracenia purpurea)的26S核糖体RNA具有很高的同源性。
- 马春泉张莹崔颖王冰王玉婷刘金玲王宏建李海英
- 关键词：CDNA文库ESTRACE技术
