国家自然科学基金(30572272)
- 作品数：5 被引量：21H指数：2
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- 壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:粒径对转染效率的影响被引量：11
- 2007年
- 研究粒径对壳聚糖（chitosan，CS）纳米粒介导的转染效率的影响。通过调整CS溶液加入质粒基因（plasmid DNA，pDNA）溶液的速度和涡旋时间制备250，580和1300nm粒径pDNA/CS纳米粒，研究粒径对CS介导的细胞转染效率的影响。为深入探讨粒径对转染效率的影响，考察了3种粒径pDNA/CS纳米粒的药剂学性质，对抗核酸酶作用和细胞对纳米粒的吸附和摄取行为。结果表明：本文制备的3种粒径纳米粒的药剂学性质和凝聚pDNA的能力等特性基本无差别，均能有效保护pDNA免受核酸酶降解；在HEK293细胞中的转染效率无显著差异；与细胞共孵育4h，流式细胞仪测定的三者细胞摄取率与摄取量相似；荧光显微图像显示3种粒径纳米粒均以小聚集体形式吸附于细胞表面，激光扫描共聚焦显微图像显示直径约为2μm小聚集体较易被细胞内吞入胞。因此粒径在250-1300nm中对壳聚糖纳米粒介导的细胞转染率基本无影响。
- 杨晓容宗莉袁喜英
- 关键词：纳米粒PDNA粒径转染效率
- 抗动脉粥样硬化基因疫苗经鼻腔免疫黏膜毒性的初步评价
- 2009年
- 目的:考察抗动脉粥样硬化基因疫苗经鼻腔接种免疫的黏膜毒性。方法:以壳聚糖为基因载体,制备载基因疫苗的壳聚糖纳米粒。对高脂家兔模型滴鼻免疫6次,28周时取鼻黏膜及肺部组织行组织病理学检查,扫描电镜观察鼻黏膜纤毛的超微结构变化。结果:基因疫苗经鼻腔免疫可以显著诱导抗体,延缓动脉粥样硬化的发展。组织病理学检查表明,鼻黏膜及肺部组织形态正常。黏膜纤毛超微结构的扫描电镜观察表明,鼻黏膜纤毛排列有序,无断裂、脱落、倒伏等异常现象。结论:基因疫苗经鼻腔接种未致黏膜及纤毛损伤,鼻腔给药有潜力发展为一种新的接种途径。
- 蔡丹宁吴瑞袁喜英宗莉
- 关键词：鼻腔免疫基因疫苗动脉粥样硬化
- 抗动脉粥样硬化核酸疫苗纳米冻干剂的研究被引量：2
- 2011年
- 目的:碱裂解法提取编码胆固醇酯转运蛋白的质粒(简称pCETP)作为核酸疫苗,并制成适合鼻腔递送的载核酸疫苗壳聚糖纳米冻干剂。方法:碱裂解法大量提取抗动脉粥样硬化核酸疫苗,以壳聚糖(简称CS)为非病毒载体,复凝聚法制备pCETP/CS纳米粒,正交设计筛选最佳pCETP/CS纳米冻干剂处方。结果:提取了纯度可靠的pCETP,制得的pCETP/CS冻干剂具有较高的包封率(94.6%)和载药量(27.3%),重分散后纳米粒粒径为(375±18)nm,pCETP浓度可达4000μg.mL-1,较冻干前提高40倍。结论:pCETP/CS冻干剂具有良好的稳定性和重分散性,为适合鼻内递送的载基因微粒制剂,具有较好的研究前景。
- 杜明珠姚文军宗莉
- 关键词：动脉粥样硬化核酸疫苗壳聚糖纳米粒冻干剂
- 壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:影响转染效率的因素被引量：7
- 2008年
- 目的：以增强型绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）为报告基因，探讨影响壳聚糖（CS）介导的基因转染率的因素。方法：复凝聚法制备pEGFP／CS纳米粒，选用HEK293细胞，考察CS相对分子质量、CS中的氨基与pEGFP中的磷酸基的比值（N／P比）、纳米粒粒径、介质pH值和血清对转染率的影响。结果：相对分子质量5×10^3的CS获得较高转染率；转染率随N／P比增加而提高；介质pH≤6．8有利于转染；在230～1290nm范围，粒径对转染效率无影响；CS介导的转染不受血清影响。结论：CS相对分子质量、N／P比和介质pH值是影响转染率的因素，低相对分子质量水溶性CS有利于提高转染。
- 张淑芸袁喜英杨晓容宗莉
- 关键词：壳聚糖PEGFP纳米粒转染效率
- 荧光探针示踪pDNA/壳聚糖纳米粒在细胞内转运被引量：2
- 2008年
- 目的采用荧光探针追踪质粒DNA(pDNA)/壳聚糖(CS)纳米粒在细胞内转运轨迹,分析CS介导的细胞转染屏障。方法绿色荧光蛋白质粒基因作为报告基因进行体外转染实验,用异硫氰酸荧光素分别标记pDNA和CS,荧光显微镜下观察细胞对pDNA/CS纳米粒的吸附,流式细胞技术测定细胞对pDNA/CS纳米粒的摄取率,激光扫描共聚焦显微镜下观察pDNA/CS纳米粒在细胞内转运和入核过程。结果pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式吸附在细胞表面,细胞吸附受介质pH值的影响。流式细胞仪定量分析表明,细胞对pDNA/CS纳米粒有高摄取率,共温孵4h,细胞摄取率为88·8%。激光扫描共聚焦显微图像显示,pDNA/CS纳米粒依赖细胞内吞功能经细胞(内外)转运通道进入细胞。pDNA/CS纳米粒与细胞共温孵3h,CS主要分布在胞浆中,pDNA不仅分布在胞浆中,核内也清楚可见荧光标记的pDNA。结论荷正电的pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式被细胞吸附,通过细胞胞吞作用进入细胞。pDNA/CS纳米粒主要在胞浆中解离,pDNA入核。实验提示,增加pDNA/CS纳米粒在胞浆中解离将有助于提高CS介导的转染效率。
- 杨晓容宗莉朱敏艳袁喜英吴政宏
- 关键词：质粒DNA纳米粒
