国家重点基础研究发展计划(2005CB522507)
- 作品数：28 被引量：165H指数：7
- 相关作者：罗小平宁琴邱正庆魏珉刘坚更多>>
- 相关机构：华中科技大学北京协和医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划卫生部临床学科重点项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 胰岛素受体底物在宫内发育迟缓新生鼠肌肉组织中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的探讨胰岛素受体底物(IRS-1I、RS-2)基因在宫内发育迟缓(IUGR)新生鼠心肌、骨骼肌(股四头肌)中的表达及意义。方法采用母孕期饥饿法建立IUGR新生鼠模型,正常新生鼠作对照,应用RT-PCR技术检测心肌、股四头肌组织IRS-1I、RS-2mRNA水平,凝胶电泳条带用成像系统照相定量分析结果,分别计算PCR产物条带与-βactin条带光密度值的比值,作为目的基因相对表达量。结果IUGR鼠出生时体质量、身长显著小于对照组(P均<0.01)。IUGR新生鼠心肌IRS-1 mRNA相对表达水平显著高于对照组(t=2.568 P=0.022),股四头肌IRS-1 mRNA相对表达水平、心肌IRS-2 mRNA相对表达水平显著低于对照组(t=2.868 P=0.012;t=2.358 P=0.035),股四头肌IRS-2 mRNA相对表达水平与对照组相比无显著差异(t=1.426 P=0.177)。结论IUGR对心肌、骨骼肌IRS-1基因表达的影响具有组织选择性,心肌IRS-1基因表达上调是适应宫内营养不良环境的结果;骨骼肌IRS-1基因表达下降,并可能“程序化”,可能是IUGR易患代谢综合征的分子机制之一。
- 王谦应艳琴宁琴罗小平
- 关键词：胰岛素受体底物胎儿代谢综合征
- 宫内炎性暴露对胎鼠及早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的 观察宫内炎性暴露对胎鼠及早产大鼠肺血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，vEGF）及其受体-1（Fms-like tyrosine kinase receptor，Flt-1）和受体-2（fetal liver kinase receptor，Flk-1／KDR）表达的影响，探讨其与新型支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）的关系。方法定期受孕的SD大鼠随机分为脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）组（LPS组）和生理盐水组（对照组），于孕15d分别向羊膜腔内注射LPS或无菌生理盐水。两组动物均于胚胎19d及早产鼠出生后第1、3、5、7天各随机取8只仔鼠，采用免疫组织化学方法和RT-PCR技术检测肺组织VEGF及F1t-1、Flk-1蛋白及mRNA表达水平。结果对照组肺组织中VEGF及Flk-1的蛋白表达自胚胎19d至生后7d逐渐升高，LPS组VEGF蛋白表达在胚胎19d（0．1550±0．0101）和生后1d时（0．1368±0．0035）较对照组低（O．1872±0．0110和0．1812±0．0040）（P〈0．05）。两组生后1d时的Flt-1蛋白表达均高于胚胎19d时（P〈0．05）。LPS组Flt-1蛋白表达在各时间点均较对照组高（P〈0．05），而Flk-1表达在各时间点均较对照组低（P〈0．05）。mRNA的表达与相应蛋白表达的强度变化基本一致。结论宫内炎性暴露可降低胎鼠及早产大鼠出生早期肺组织中VEGF及Flk-1的表达，可能是导致新型BPD发生的重要因素。
- 王伟黄波韦伟宁琴罗小平
- 关键词：脂多糖类血管内皮生长因子A血管内皮生长因子受体1
- 神经管缺损大鼠转化生长因子-β_2及其受体的表达
- 2007年
- 目的建立大鼠脊柱裂动物模型,探讨神经管缺损的产生和转化生长因子-β_2(TGF-β_2)及其受体(TGFβRⅠ、TGFβRⅡ)的关系。方法维甲酸灌胃建立Wistar大鼠脊柱裂动物模型,用RT-PCR方法检测各组胎鼠脊髓和脑中TGF-β_2、TGFβRⅠ及TGFβRⅡ的mRNA表达水平,用免疫组织化学方法检测各组胎鼠脊髓和脑中TGF-β_2、TGFβRⅠ以及TGFβRⅡ的蛋白表达水平。结果维甲酸组胎鼠体重明显低于对照组,脊柱裂的发生率为73.1%。脊柱裂胎鼠脊髓组织中TGF-β_2的mRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著降低,TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的mRNA及蛋白水平与对照组相比显著升高。脊柱裂胎鼠脑组织中TGF-β_2、TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的mRAN及蛋白表达水平与对照组相比无显著差异。结论TGF-β_2在神经管的发育中起重要作用,TGF-β_2表达的降低与神经管缺损的发生有关。受体TGFβRⅠ及TGFβRⅡ的表达水平可能是反应性的增加,TGF-β_2通过它们对神经管的发育起作用。
- 张李霞祝婕刘坚宁琴罗小平
- 关键词：神经管缺损脊柱裂维甲酸转化生长因子Β
- 高氧和脂多糖诱导人胚肺成纤维细胞NF-κB的动态表达被引量：2
- 2008年
- 目的近年研究表明,支气管肺发育不良的发生与宫内炎性因子暴露和出生后机械通气、高氧暴露有着密切的联系。该研究选取人胚肺成纤维细胞,模拟炎性暴露和高氧暴露环境,探讨高氧和脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)对人胚肺成纤维细胞核转录因子NF-κB表达的影响。方法60%高氧,LPS(100ng/mL)及两者同时刺激人胚肺成纤维细胞0.5,1,2及4h,用免疫细胞化学观察其亚基p50及p65的核转位,RT-PCR方法检测NF-κBp50和p65mRNA。结果LPS的直接刺激迅速诱导p50及p65的核转位,0.5h即可致NF-κB迅速活化,1h达到高峰,后逐渐下降;高氧刺激诱导p50及p65核转位,1h达高峰,之后迅速下降;高氧和LPS联合刺激p50及p65亚基核转位,在2h达高峰,然后缓慢下降。但4h时活化效应明显高于LPS组和高氧组。结论同时暴露于高氧和LPS组人胚肺成纤维细胞中NF-κB的活化比单独暴露因素下活化更为显著,活化持续时间更长,提示暴露于宫内炎性环境中的患儿生后又高氧/辅助通气更容易导致肺部疾病。
- 章晓婷刘坚余肖宁琴罗小平
- 关键词：高氧脂多糖NF-ΚB支气管肺发育不良人胚肺成纤维细胞
- 11例中国人粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者的基因突变检测被引量：3
- 2011年
- 目的 对经酶学确诊的粘多糖贮积症Ⅰ型患者进行α-L-艾杜糖苷酸酶（α-L-iduronidase,IDUA）基因突变检测,了解中国北方地区粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者基因突变特点.方法 应用PCR扩增技术及直接测序技术对11例中国北方地区经酶学确诊的粘多糖贮积症Ⅰ型患者IDUA基因14个外显子及相邻区域进行突变筛查,同时进行亲本来源分析.结果 11例患者中检测出7种基因突变：A79V、R89Q、R89w、E178K、G197S、L346R和W626X.7种突变均为已报道过子,11例中6例患者为纯合改变,1例为无义突变杂合子;发现了9种已知多态性位点.结论 中国北方地区粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者IDUA基因的突变特点可能不同于其他国家和地区.
- 王新宁施惠平张为民邱正庆孟岩姚凤霞魏珉
- 关键词：基因突变
- 铜负荷大鼠肝脏脂质过氧化和凋亡损伤及姜黄素的保护作用被引量：10
- 2007年
- 目的观察铜负荷大鼠肝脏脂质过氧化损伤和凋亡的变化,探讨姜黄素对铜负荷大鼠肝脏的保护作用及其机制。方法建立铜负荷大鼠模型,应用姜黄素进行干预,分别检测干预前后肝组织匀浆的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及谷胱甘肽(GSH)含量,观察肝脏脂质过氧化损伤;电镜和原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶分析法(TUNEL)观察大鼠肝脏凋亡改变;RT-PCR 检测大鼠肝组织肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA 和白介素8(IL-8)mRNA 的表达;酶联免疫吸附法检测肝组织匀浆 TNF-α和 IL-8含量。结果铜负荷组 MDA 值升高,SOD 及 GSH 值下降,凋亡指数从(2.2±1.2)%上升到(16.7±2.5)%,TNF-α和 IL-8 mRNA 的表达及蛋白含量高于正常组,与正常组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。姜黄素组 MDA 值低于铜负荷组,SOD 及 GSH 值高于铜负荷组,凋亡指数从(16.7±2.5)%下降到(10.4±1.2)%,姜黄素组 TNF-α和 IL-8 mRNA 的表达及蛋白含量均低于铜负荷组,与铜负荷组相比差异有统计学意义(P<0.01)。电镜结果显示,姜黄素组大鼠肝脏线粒体肿胀、内质网扩张、溶酶体颗粒增多等改变轻于铜负荷组。结论过多的铜促进肝脏脂质过氧化损伤和诱导肝脏凋亡的发生,TNF-α和 IL-8参与铜对肝脏的损伤过程。姜黄素对铜负荷肝损伤有保护作用。
- 万小华李毓雯罗小平
- 关键词：铜姜黄素脂质过氧化作用白细胞介素8
- 铜对大鼠肝细胞凋亡的影响以及姜黄素的保护作用被引量：7
- 2007年
- 目的探讨铜对大鼠肝细胞(BRL细胞)凋亡的诱导作用及其机制,研究姜黄素对BRL细胞铜损伤时的影响。方法对硫酸铜(CuSO4)和姜黄素干预培养的BRL细胞,采用荧光探针DCFH-DA进行活性氧(ROS)测定,MTT法检测细胞活力,Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot法检测磷酸化应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)蛋白水平。结果铜处理后6h BRL细胞ROS和凋亡率达到高峰,分别为711.70±68.33,(45.08±1.87)%,铜处理后24hJNK磷酸化率上升至(63.36±2.24)%,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.01);姜黄素组ROS、凋亡百分率和JNK磷酸化率均较相应对照组下降(P<0.01)。结论一定浓度的铜可以诱导BRL细胞的凋亡且与活性氧的产生有关;姜黄素对铜损伤BRL的保护作用与抗氧化和抑制磷酸化JNK的表达有关。
- 万小华罗小平
- 关键词：铜姜黄素凋亡活性氧JNK/SAPK
- 维甲酸对胎鼠Vangl 1及Vangl 2基因表达的影响被引量：5
- 2008年
- 神经管畸形的发生是由遗传因素与环境因素共同作用产生的。平面细胞极性途径(planar cell polarity,PCP)对脊椎动物神经胚形成非常重要。该途径基因的任何突变都可能导致神经管不能闭合,与人类的颅脊柱裂相似。但是,环境因素是否影响、如何影响PCP途径基因的表达到目前仍不清楚。目的研究维甲酸对胎鼠Vangl1及Vangl2基因表达的时空特征的影响。方法全反式维甲酸橄榄油混悬液按120mg/kg在BALB/C小鼠怀孕第9·5天(E9·5)(B组)或E10·5(C组)灌胃,A组仅用橄榄油灌胃。取E9·5、E10·5、E11·5、E13·5、E15·5、E17·5、E19·5胎鼠,Vangl1及Vangl2基因表达量采用逆转录酶PCR(RT-PCR)检测,其时空表达采用全胚胎原位杂交(WISH)检测。结果结果显示,正常情况下Vangl1及Vangl2基因在整个神经胚形成过程中都有强表达。而B组胎鼠从脑到后神经孔Vangl1及Vangl2基因表达显著下调。C组较复杂,二基因表达在全胚胎(从E11·5到E13·5)及神经管脊柱区(从E15·5到E19·5)显著下调并维持低表达,但在神经管的颅区(E15·5到E19·5)仅中度下调。结论:结果提示,维甲酸诱导的神经管畸形的发生与Vangl1及Vangl2基因转录子下调有关。
- 刘坚戚静祝婕张李霞宁琴罗小平
- 关键词：神经管缺陷脊柱裂维甲酸
- Laron综合征家系患者生长激素受体基因突变分析被引量：3
- 2007年
- 目的研究Laron综合征患者的临床特点及生长激素受体(GHR)的基因突变。方法对一家系中2例表现为身材明显落后的患儿进行研究,分别进行体格测量和GH-IGF-I轴功能测定。提取外周血白细胞基因组DNA,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增GHR基因第2～9外显子及其两侧的侧翼序列,直接进行测序,将所测结果与正常人GHR基因序列进行对比,确定突变位点和突变类型。对突变基因均经2次测定证实。结果2例患儿自出生后身长明显落后于同龄儿童,呈现Laron综合征的独特面貌,空腹血清GH值均明显高于正常儿童。空腹血清IGF-I明显低于同年龄同性别正常儿童。血浆IGFBP-3和GHBP低于检测线。GHR基因序列测定结果显示2例患儿均存在外显子4上第65为氨基酸的纯合突变S65H,为新发现突变。结论Laron综合征患者存在典型的面貌特征,结合血GH、IGF-I、IGFBP-3和GHBP测定可以明确诊断。GHR基因外显子4上S65H突变可能是该Laron综合征患者的致病原因。[临床儿科杂志,2007,25(12):971-973]
- 应艳琴魏虹曹励芝吕娟娟罗小平
- 关键词：基因突变
- 宫内脂多糖暴露后新生大鼠脑髓鞘基质蛋白、胶质纤维酸性蛋白、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α的表达变化
- 2010年
- 目的探讨宫内脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）暴露后新生大鼠脑中炎症因子的表达与脑白质损伤的关系。方法向孕19dSD大鼠宫内注射LPS（0．4μg／孕囊间）构建宫内感染大鼠模型作为LPS组（n=14），对照组给予同体积的无菌生理盐水（n=10）。取1、3、7、11日龄新生大鼠脑标本（每组每时间点6只），通过免疫组织化学方法检测髓鞘基质蛋白与胶质纤维酸性蛋白在新生大鼠脑组织中的表达；采用逆转录-聚合酶链反应技术检测脑组织白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α mRNA的水平。组间差异比较采用t检验。结果（1）LPS组孕鼠胎盘组织HE染色可见显著炎性细胞浸润、间质明显增生、毛细血管腔变窄。（2）LPS组11日龄新生大鼠小脑、间脑髓鞘基质蛋白表达分别为1．29±0．76和1．71±0．49，均较对照组（分别为2．43±0．79和2．50±0．76）明显减少（P均〈0．05）；而LPS组11日龄新生大鼠海马、胼胝体、间脑和小脑中胶质纤维酸性蛋白的表达分别为2．71±0．49、2．40±0．55、1．50±0．55和2．80±0．45，均较对照组（分别为1．75±0．50、1.50±0．58、1．00±0．00和1．60±0．55）增强（P均〈0．05）。（3）LPS组与对照组1、3、7、11日龄新生大鼠脑组织中白细胞介素-1β与肿瘤坏死因子-αmRNA的表达差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论宫内LPS暴露导致宫内炎性改变、影响胎盘血供，并致新生大鼠低出生体重，可能引起新生大鼠出现以低髓鞘化及反应性星形胶质化为特征的脑白质损伤。
- 戴红梅肖彩菊余肖王伟应艳琴宁琴罗小平
- 关键词：脂多糖类
