国家自然科学基金(30270986)
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
- 相关作者：何昭阳姜秀云王春芳王春凤高云航更多>>
- 相关机构：吉林农业大学惠州出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛分枝杆菌MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2005年
- 以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB63成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约400 bp的DNA片段. 通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-63. 以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-63和pET28a(+),并将纯化的MPB63基因亚克隆至pET28a (+)中,构建出原核表达载体pET28a-63. 将pET28a-63转化至感受态E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见约18 ku外源蛋白带. 蛋白质印迹分析发现,该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB63的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.
- 姜秀云王春凤王春芳何昭阳
- 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达
- 牛分枝杆菌MPB51基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 2005年
- 以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板 ,以MPB5 1成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增 ,获得约80 0bp的DNA片段。通过T- A克隆技术 ,将PCR产物克隆至pGEM TVector中 ,成功地构建出克隆质粒pGEM T -5 1。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM T- 5 1和pET2 8a(+) ,并将纯化的MPB5 1基因亚克隆至pET2 8a (+)中 ,构建出原核表达质粒pET2 8a- 5 1。将pET2 8a- 5 1转化至感受态E .coliBL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导和SDS PAGE分析 ,可见约30kD外源蛋白带。Westernblot分析发现 ,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性 ,从而为进一步研究MPB5 1的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。
- 姜秀云王春凤王春芳何昭阳
- 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达
- 排除牛结核变态反应中禽结核干扰的研究被引量：4
- 2008年
- 以牛型结核菌素和禽型结核菌素对黑龙江省部分地区300头牛进行牛结核病检测,按OIE、中国和欧共体对皮内变态反应判定标准进行结果判定,同时以ELISA方法对牛血清进行检测。不同方法不同标准检测结果的比较分析结果表明:在牛结核的检疫中存在禽结核的干扰,采用牛型结核菌素和禽型结核菌素皮内变态反应结合ELISA方法进行检疫可排除禽结核的干扰。
- 李金岭徐青元周宇何昭阳
- 关键词：牛结核变态反应ELISA
- 活体电穿孔法导入DNA:牛结核病免疫接种新技术
- 2005年
- 姜秀云何昭阳
- 关键词：MB电穿孔法阳性牛结核病防制措施免疫接种
- 牛分枝杆菌MPB64基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2009年
- 王春芳张慧清姜秀云钱爱东何昭阳
- 关键词：牛分枝杆菌大肠杆菌人兽共患传染病牛结核病变态反应防制措施
- 牛分枝杆菌Ag85B基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,根据已发表的Ag85B成熟蛋白基因的核苷酸序列设计合成特异性引物进行PCR扩增,获得约860bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T载体中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-85B。以BamH和EcoR双酶切pGEM-T-85B和pET28a(+),并将纯化的Ag85B基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-85B。将pET28a-85B转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约30000的外源蛋白带。Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究Ag85B的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定了基础。
- 姜秀云王春凤王春芳何昭阳
- 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达
- ELISA检测牛结核抗体时假阳性反应的消除被引量：10
- 2004年
- 以草分枝杆菌作为吸收抗原处理待检血清 ,吸收其中的非特异性类属抗体 ,提高了牛结核 EL
- 高云航何昭阳单晓枫白宇
- 关键词：ELISA草分枝杆菌结核分枝杆菌
- 结核病基因诊断技术研究进展被引量：1
- 2005年
- 姜秀云何昭阳
- 关键词：基因诊断技术结核病耐药性菌株世界卫生组织结核杆菌
- 牛分枝杆菌Ag85A基因在大肠埃希氏菌中的表达被引量：1
- 2005年
- 以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切已构建的pGEM-T-85A和pET28a(+),并将纯化的Ag85A基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达质粒pET28a-85A。将pET28a-85A转化至感受态E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约32 ku的外源蛋白带。Western-blotting分析表明,该蛋白具有牛分枝杆菌的抗原性。
- 姜秀云王春凤王春芳何昭阳
- 关键词：牛分枝杆菌原核表达
- 3种方法检测结核污染牛场的比较被引量：10
- 2003年
- 应用牛结核变态反应、牛结核斑点免疫金银染色法 ( Dot- IGSS)和 EL ISA 3种方法 ,同时检测结核污染牛场的4 98头份牛血清。结果发现 ,阳性检出率以变态反应为最高 ( 2 8.3% ) ,Dot- IGSS居中 ( 2 7.3% ) ,EL ISA最低 ( 17.2 % ) ;变态反应与 Dot- IGSS和 EL ISA的符合率较差 ,而 EL ISA和 Dot- IGSS具有较好的符合率 ;在变态反应阴性牛中 ,仍然检出了部分 Dot- IGSS和 EL ISA阳性牛。由此认为 ,先以变态反应检疫牛群 ,再随之实施抗体检测 。
- 张喜悦王君玮高云航何昭阳
- 关键词：结核病变态反应ELISA抗体检测
