国家自然科学基金(30270989)
- 作品数：15 被引量：45H指数：5
- 相关作者：章金刚吕茂民吴健敏杨姝阳玉彪更多>>
- 相关机构：军事医学科学院广西兽医研究所华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家社会公益研究专项计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪内源性反转录病毒5′非编码区启动子活性的分析被引量：1
- 2007年
- 【目的】构建以缺失不同功能区的猪内源性反转录病毒(PERV)5′非编码区(5′UTR)为启动子的萤光素酶表达载体,分析5′UTR的转录调控规律。【方法】将含有不同功能域的PERV的UTR克隆至萤光素酶表达载体上,转染瞬时表达细胞Cos-7,检测萤光素酶的表达。【结果】缺失R区的5′UTR显示出很强的启动子活性,U3重复区序列缺失的5′UTR启动子活性显著下降。UTR显示出较之LTR强的启动子活性。缺失整个U3区的UTR比仅缺失U3重复区的UTR启动子活性强。【结论】在R区有转录因子的结合位点可引起转录活性下降;U3重复区序列表现出增强子的活性。在5′UTR的下游序列中,包括引物结合区(PBS)和前导序列(Leader)可能有某些转录因子的结合位点引起转录增强,同时在U3重复区的上游和下游序列可能存在某些转录因子的结合位点可减少5′UTR的转录活性。
- 丁芳吕茂民马玉媛吴健敏田克恭毕丁仁章金刚
- 关键词：猪内源性反转录病毒启动子活性
- 我国小型猪内源性反转录病毒的相关研究
- 随着移植医学和免疫学研究的进展,也由于人源供体器官的短缺,猪被选定为最合适的异种移植供体。现今,猪心脏瓣膜已成功地移植入人体内,猪皮肤已作为烧伤病人的暂时覆盖物,猪胰岛细胞已被植入糖尿病人体内,猪→人异种移植已展现出十分...
- 马玉媛吕茂民吴建敏丁芳徐述阳玉彪郭艳茹田克恭章金刚
- 文献传递
- 猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞模型的建立被引量：10
- 2003年
- 目的 建立猪内源性反转录病毒感染HEK2 93细胞的模型 ,验证PERV在体外对人源细胞的感染性 ,并进一步研究PERV的生物学特性。方法 将G4 18抗性的HEK2 93细胞与猪源PK 15细胞共培养 ,6周后 ,用含有6 0 0 μg mlG4 18的选择性培养基对共培养细胞进行加压筛选 ,用以除去共培养体系中的PK 15细胞 ;然后应用PCR及RT PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定。结果 经 6周共培养及 3周加压筛选后 ,细胞的形态、生长速度及折光性均未见明显变化 ;PCR及RT PCR鉴定表明 ,筛选后的共培养体系中已没有PK 15细胞的存在 ;PERV特异性检测方法检测显示 ,该细胞模型的DNA中已有PERV的整合且有PERV特异性mRNA的表达。结论 本实验成功建立了PERV感染HEK2 93细胞的模型 ,证实了PERV在体外对人源细胞具有感染性 ;
- 吕茂民贾莉玮斯日古愣杨文斌杨姝章金刚
- 关键词：细胞模型病毒安全性异种移植
- 用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3'LTR被引量：1
- 2004年
- 测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。
- 吕茂民谢放吴健敏章金刚
- 关键词：五指山猪猪内源性反转录病毒同源性分析
- 中国巴马小型猪内源性反转录病毒的检测被引量：8
- 2003年
- 目的 :对我国特有巴马小型猪内源性反转录病毒 ( porcine endogenous retrovirus,PERV)的存在与 m RNA的表达情况进行检测 ,了解巴马小型猪内源性反转录病毒的携带情况。方法 :根据以往建立的 PCR、RT-PCR检测方法 ,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的 DNA和RNA样品进行 PERV核心蛋白基因 ( gag)、多聚酶基因 ( pol)及囊膜基因 ( env)的存在与表达进行检测 ;同时 ,根据目前通用的 env基因分型方法检测 PERV env-A、env-B、env-C的存在与表达。结果 :在 1 2个被检的 DNA样品中均检出了PERV特异性 DNA的存在 ;同样 ,在 1 2个被检的 RNA样品中均有 PERV特异性 RNA的表达 ,且所表达的 PERV均为 A型和 B型 ;其中有9个 DNA样品检测出 PERV-C型的存在 ,所有样品中均未检出 C型 PERV的表达。结论 :检测结果表明 1 2个被检巴马小型猪基因组中存在着内源性反转录病毒序列 ,且能以 m RNA的形式表达 ,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础。
- 徐斯日古楞吕茂民吴健敏章金刚
- 关键词：巴马小型猪
- 巴马小型猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞模型的建立被引量：1
- 2006年
- 首先将巴马小型猪(BM)、巴马香猪(BMXZ)外周血淋巴细胞分别与G418抗性HEK293细胞(G418R293)共培养,通过G418加压筛选,除去共培养体系中巴马小型猪、巴马香猪外周血淋巴细胞,然后应用PCR及RT-PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定。结果经6周共培养及3周加压筛选后,细胞的形态、生长速度及折光性均未见明显变化;PCR及RT-PCR鉴定表明,筛选后的共培养体系中已没有巴马小型猪、巴马香猪外周血淋巴细胞的存在;PERV特异性检测方法检测显示,该细胞模型的DNA中已有PERV的整合且有PERV特异性mRNA的表达。从而证实了猪外周血淋巴细胞来源的PERV在体外也能够感染人源细胞系,为研究PERV的生物学特性及病原安全性的评价搭建了技术平台。
- 黄红梅吕茂民陈忠伟王娜赵武陈凤莲吴健敏章金刚
- 关键词：HEK293细胞猪内源性反转录病毒
- 中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析被引量：3
- 2006年
- 目的 克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法 应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆入T载体后测序；随后以PCR方法对克隆PERV env基因进行分型检测；最后采用DNAsis及DNAstar软件对克隆的env基因和国外毒株env基因进行同源性及系统进化进行分析比较。结果 本试验所克隆的3株PERV env基因长度分别为1983bp、1986bp及1968bp，分别编码661、662和656个氨基酸，分型检测均为PERV-A亚型。同源性分析表明：国内这3个分离株env基因与国外来源于不同宿主的PERV-A、B、C亚型env基因的同源性分别在92．8～96．5％、69．4～73．4％及77．5％～80．8％之间。结论 PERV中国株的进化与A、B、C亚型分类有关，与宿主、分布地域关系不大，且PERV—A亚型与C亚型的亲源关系更近于B亚型。
- 吴健敏吕茂民陈凤莲谢放潘汉世阳玉彪马玲章金刚
- 关键词：猪内源性反转录病毒囊膜基因
- 中国巴马小型猪封闭群内源性反转录病毒存在状况分析被引量：4
- 2005年
- 检测分析猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus;PERV)在中国巴马小型猪封闭群中的携带情况。根据本实验室已建立的PCR、RT_PCR检测方法,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行PERV核心蛋白基因(gag)、多聚酶基因(pol)及囊膜基因(env)的存在与表达进行检测;同时根据目前通用的env基因分型方法检测PERVenv_Ae、nv_Be、nv_C的存在与表达情况。所有被检样品不仅存在PERV gag、pol、env特异性DNA,而且都能够转录为RNA;所有样品同时存在PERV A、B亚型的前病毒,且有70%个体还同时存在PERV_C亚型前病毒,但仅有90%样品检测到PERV_A亚型的表达,50%检测到PERV_B亚型的表达,而所有的样品均未检测到PERV_C型的表达。巴马小型猪封闭群外周血淋巴细胞基因组中存在PERV_A、B、C 3种亚型,但仅有A、B两种亚型能够表达。PERV_A、B、C 3种亚型的同时存在,预示着巴马小型猪封闭群中存在不同亚型病毒重组的可能性。
- 吴健敏阳玉彪郭艳茹吕茂民郭亚芬章金刚
- 关键词：巴马小型猪猪内源性反转录病毒病毒亚型
- 五指山猪内源性反转录病毒5’端非编码区的RACE扩增及其结构和调控元件分析
- 目的获得五指山猪内源性反转录病毒5’端非编码区(5’UTR)cDNA,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础。方法采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆来源于五指山猪的内源...
- 吴健敏阳玉彪吕茂民谢放郭艳茹章金刚
- 关键词：克隆顺式作用元件
- 文献传递
- 聚合酶链反应检测4种猪源细胞系中的内源性反转录病毒(英文)被引量：10
- 2003年
- 为了建立检测猪内源性反转录病毒 (porcine endogenous retrovirus,PERV)的特异性方法 ,根据已发表的 PERV的序列 ,设计并合成了针对 PERV核心蛋白 (gag)、多聚酶 (pol)、囊膜蛋白 (env)基因的 3对引物 ,预期扩增片段分别为 36 1、15 0、2 6 5 bp。应用 PCR技术检测了 PERV在 4株猪源细胞中的整合情况。结果表明 ,在所有被检细胞的基因组中均存在有 PERV的前病毒序列 ;应用 RT- PCR检测上述 4株猪源细胞中 PERV特异性 m RNA的表达 ,结果均为阳性。试验还对建立的上述 2种方法的特异性进行了探讨 ,结果表明试验建立的 PERV检测法具有较高的特异性。该方法的建立为进一步研究 PERV奠定了基础 ,还可对异种移植动物模型及异种移植受体进行病原安全性监测。
- 吕茂民金红邓瑞春王建国杨姝熊景峰丁壮章金刚
- 关键词：聚合酶链反应检测
