浙江省科技计划项目(2003C22002)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 基于RNA聚合酶Ⅱ的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立
- 2008年
- 应用重叠PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5'末端和3'末端分别引入具有自我剪切功能的核酶HamRz和HDV序列,然后分别将含有核酶序列的A、B节段构建到pCI真核载体当中,构建真核载体pCI-ma核pCI-mb。在脂质体介导下,将pCI-ma和pCI-mb共转染Vero细胞。细胞病变观测、间接免疫荧光试验和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救。
- 魏永伟侯贤宏章晓栋徐弘吕冬梅于涟
- 关键词：IBDV
- 基于T7 RNA聚合酶的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立
- 2008年
- 为了建立传染性法氏囊病病毒反向遗传系统,应用PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基因组A、B两节段的5末端和3末端分别引入T7启动子和核酶HDV序列,然后分别将含有T7启动子和核酶HDV序列的A、B节段构建到载体PT-Pluc当中,构建感染性载体PT-mA和PT-mB.在脂质体介导下将PT-mA和PT-mB共转染经痘病毒vTF7-3(含T7 RNA聚合酶基因,能稳定表达T7 RNA聚合酶)预先感染1 h的vero细胞.细胞病变观测、间接免疫荧光试验、电镜观察和分子标记检测证实成功实现了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救.
- 魏永伟章晓栋侯贤宏徐弘于涟
- 关键词：IBDVT7RNA聚合酶
- 鸡传染性法氏囊病病毒(ZJ2000)基因组B节段全长的克隆及其毒力位点的分析预测被引量：2
- 2007年
- 将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9～10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登录的IBDV基因组B节段进行了大量分析,发现B节段的5′-NCR存在1个基因高突变区,并且ZJ2000株的5′-NCR可形成独特的二级结构。经过对VP1一级结构的大量分析,筛选出B节段中17个可能对IBDV毒力产生影响的候选毒力位点,并在此基础上又对这些位点氨基酸的特性进行统计分析,进一步探讨了这些位点对VP1功能影响的可能性,为深入研究IBDV基因组B节段对其毒力的影响作了有益的探索。
- 魏永伟郑江涛王连胜李龙于涟
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒克隆
